Гены и Клетки
Рецензируемый научно-информационный и аналитический журнал.
Главный редактор
- Лагарькова Мария Андреевна, д.б.н., профессор, член-корр. РАН
ORCID iD: 0000-0001-9594-1134
Издатель
Учредители
- ООО "Гены и клетки"
- ФГБУ "ФНКЦ физико-химической медицины имени академика Ю.М. Лопухина ФМБА"
- ООО "Эко-Вектор"
О журнале
«Гены и Клетки» (старое название «Клеточная Трансплантология и Тканевая Инженерия») – ежеквартальный рецензируемый научно-практический журнал, публикуемый с 2005 года.
Тематические направления журнала:
|
Основные рубрики
|
Типы принимаемых к рассмотрению рукописей
|
Публикации
|
Объявления Ещё объявления...
![]() Новости: МАТЕРИАЛЫ МЕЖДУНАРОДНОГО КОНГРЕССА CRISPR-2023Размещено: 10.09.2023
Опубликованы МАТЕРИАЛЫ МЕЖДУНАРОДНОГО КОНГРЕССА CRISPR-2023 Скачать сборник тезисов докладов по ссылке.
|
|
![]() Блоги: 15 Месяцев: дисферлинопатия. Часть первая: с широко закрытыми глазамиРазмещено: 08.09.2023
Дисферлинопатии – группа редких (орфанных) мышечных дистрофий, характеризующаяся мышечной слабостью и атрофией различных групп мышц вплоть до полной инвалидизации. Заболевание встречается редко — 7,4 : 1 000 000 новорожденных, а проявления начинаются незаметно, что затрудняет постановку диагноза. «Орфанными» редкие заболевания называются не случайно. Здесь присутствует своеобразная игра слов: «to adopt» – «принять в семью» или же «внедрить» применимо, скажем, к исследованиям заболеваний, и «orphan» – «cирота». Об их существовании врачи зачастую не знают, а значит, не могут диагностировать. Исследованием путей их лечения не заинтересованы крупные фармакологические компании. Сиротами чувствуют себя страдающие ими пациенты. |
|
![]() Блоги: 15 Месяцев: миодистрофия Дюшенна — рожденный бегать бежать не может ☹Размещено: 02.08.2023
Миодистрофия Дюшенна — тяжёлая наследственная мышечная дистрофия; родители могут ее заметить достаточно рано — с первых шагов ребенка или, когда их малышу исполнится в среднем, от 2 до 5 лет. Мышечная слабость быстро прогрессирует, лишает ребенка, а затем и взрослого человека привычной нам физической активности, без лечения эта болезнь в 100% случаев заканчивается смертью. А как сложится судьба пациента если изобрести самое современное и самое совершенное лекарство — генную терапию? Мы пока этого не знаем, но уже сейчас первые препараты для генной терапии начинают использовать для лечения таких детей. |
|
Текущий выпуск
![Открытый доступ](https://genescells.ru/lib/pkp/templates/images/icons/text_open.png)
![Доступ закрыт](https://genescells.ru/lib/pkp/templates/images/icons/text_unlock.png)
![Доступ закрыт](https://genescells.ru/lib/pkp/templates/images/icons/text_lock.png)
Том 19, № 2 (2024)
- Год: 2024
- Выпуск опубликован: 01.07.2024
- Статей: 7
- URL: https://genescells.ru/2313-1829/issue/view/8783
- DOI: https://doi.org/10.17816/gc.192
Обзоры
Особенности получения и дифференцировки индуцированных плюрипотентных стволовых клеток в клетки сетчатки для моделирования наследственных заболеваний человека
Аннотация
Использование технологии получения индуцированных плюрипотентных стволовых клеток (ИПСК) с их последующей дифференцировкой является перспективным подходом для изучения патогенеза заболеваний и разработки способов терапии оптических нейропатий и ретинопатий — наиболее распространённых типов патологий зрительной системы, при которых происходит дегенерация ганглиозных клеток сетчатки (и как следствие — атрофия зрительного нерва) или поражаются клетки пигментного эпителия и фоторецепторы, соответственно. Перспектива получения специфичных для пациента ИПСК добавила мощный альтернативный инструмент обнаружения новых вызывающих заболевания мутаций, изучения взаимосвязей между генотипом и фенотипом, проведения скрининга терапевтической токсичности и разработки персонализированной клеточной терапии оптических нейропатий и ретинопатий.
Многочисленные работы демонстрируют возможность создания из ИПСК различных типов клеток сетчатки, что обеспечивает бурное развитие направления исследований заболеваний человека, для которых отсутствуют релевантные животные модели или ограничен доступ к первичным тканям и клеткам человека.
В настоящем обзоре представлено разнообразие протоколов по получению из соматических клеток ИПСК с их последующей дифференцировкой с акцентом на наблюдаемые биологические эффекты получаемых клеточных культур, в том числе и органоидов, а также обсуждаются перспективы использования таких моделей. Статья может быть полезна исследователям, изучающим патогенез различных наследственных форм слепоты, и разработчикам подходов к терапии этих заболеваний, нуждающимся в получении релевантной клеточной модели.
![pages](/img/style/pages.png)
![views](/img/style/views.png)
![](/img/style/loadingSmall.gif)
Вирус-опосредованная нейрон-специфическая ретроградная доставка генов при травме спинного мозга
Аннотация
Вирус-опосредованный нейрон-специфический ретроградный перенос служит эффективным инструментом для определения локализации тел нейронов, выявления межнейронных связей, а также для ретроградной доставки терапевтических трансгенов с целью поддержания и восстановления функции нейронов. При экспериментальной травме спинного мозга ретроградный перенос терапевтических трансгенов имеет ряд преимуществ перед другими более распространёнными способами доставки. Среди них — целевой перенос генетической конструкции в тела спинальных нейронов конкретных типов, малая инвазивность, сравнительно невысокий риск воспалительного ответа и возможность повторных инъекций. Большое внимание в исследованиях с ретроградным переносом уделено повышению его эффективности путём модификации капсидов и применения новых промоторов.
В обзоре наиболее детально рассмотрены результаты работ по вирус-опосредованному нейрон-специфическому ретроградному переносу трансгенов при внутримышечном введении генетических конструкций. В технологии ретроградной доставки существует возможность выбора между моносинаптическим и полисинаптическим переносом в зависимости от применения определённого вирусного вектора. Отдельно рассмотрены эффекты вирус-опосредованной ретроградной трансдукции как спинальных мотонейронов, так и интернейронов, которые вместе формируют двигательные нейронные сети. Доставляя трансген путём ретроградного переноса по аксонам из периферии в перикарионы спинальных нейронов, можно ожидать действия не только в достаточно обширной области спинного мозга, но также и в супраспинальных структурах, что важно для восстановления протяжённых нейронных связей.
![pages](/img/style/pages.png)
![views](/img/style/views.png)
![](/img/style/loadingSmall.gif)
Оригинальные исследования
Поиск генных вариантов, влияющих на тяжесть течения COVID-19, на основе результатов секвенирования клинического экзома
Аннотация
Обоснование. Генотип человека является одним из факторов, определяющих тяжесть течения COVID-19. Ранее в широкомасштабном полногеномном исследовании ассоциаций COVID-19 HG project (COVID-19 Host Genetics Initiative, 2021) рассматривалась связь генетических вариантов, включающих множество локусов, с тяжестью течения данного заболевания. Ожидается, что генетические варианты, оказывающие наибольшее влияние на тяжесть течения COVID-19, будут иметь низкую частоту в популяции. Таким образом, изучение редких вариантов может дать дополнительные сведения о патогенезе заболевания и, следовательно, помочь в разработке способов его профилактики и лечения.
Цель исследования — поиск генов, обогащённых редкими генетическими вариантами, связанными с тяжестью течения COVID-19, на данных российской популяции при помощи репликационного анализа.
Методы. Проведено секвенирование клинического экзома российской когорты пациентов на базе СПб ГБУЗ «Городская больница № 40» и СПбГУ. В исследовании использовали биоматериал пациентов, госпитализированных в СПб ГБУЗ «Городская больница № 40» с диагнозом COVID-19, и здоровых людей, вошедших в группу популяционного контроля. Тяжесть течения COVID-19 определяли по результатам компьютерной томографии лёгких. Список генов для последующей репликации был сформирован в результате анализа литературы. Репликационный анализ генов, ассоциированных с тяжестью течения COVID-19, был выполнен с помощью методов нагрузочного тестирования (burden test).
Результаты. Проведено секвенирование 701 клинического экзома: 263 пациентов с тяжёлым течением COVID-19 и 438 здоровых доноров. В результате анализа литературы было найдено 18 генов, ассоциированных с тяжёлым течением COVID-19, которые вошли в репликационный анализ. Он не выявил генов, ассоциация которых с тяжёлым течением COVID-19 подтвердилась бы на исследуемой когорте.
Заключение. Несмотря на то, что генов, для которых была бы найдена значимая ассоциация между обогащением функциональными вариантами и тяжестью течения COVID-19, не обнаружено, рассчитанное направление корреляционной связи совпадает с данными ранее проведённых исследований. Расширение исследуемой когорты приведёт к усилению мощности тестов и, возможно, позволит обнаружить дополнительные редкие варианты, влияющие на тяжесть течения COVID-19.
![pages](/img/style/pages.png)
![views](/img/style/views.png)
![](/img/style/loadingSmall.gif)
Влияние условий хранения на жизнеспособность сфероидов, полученных из первичных культур хондроцитов человека
Аннотация
Обоснование. Создание тканеинженерных препаратов для терапии повреждений гиалинового хряща в настоящее время является перспективным направлением регенеративной медицины. Исследование условий хранения и транспортировки таких препаратов — важный этап в разработке, поскольку определяет жизнеспособность и функциональную активность клеточного компонента, составляющего препарат. Кроме того, такая работа должна проводиться, согласно требованиям законодательства Российской Федерации, перед использованием разработанного лекарственного препарата в клинических исследованиях.
Цель исследования — подбор условий хранения прототипа препарата тканевой инженерии в виде хондросфер.
Методы. Хондросферы формировали на основе первичных культур хондроцитов человека, полученных из биопсийного материала хряща коленного сустава пациентов с диагнозом, соответствующим кодам М15–М19 по международной классификации болезней 10-го пересмотра. После формирования хондросфер изучали клеточную жизнеспособность с помощью метаболического красителя PrestoBlue и сохранность экспрессии хондрогенных маркёров (SOX9, аггрекана, коллагена I и II типа) с помощью ПЦР в режиме реального времени при различных условиях транспортировки: сроках хранения, составе среды и температуре.
Результаты. Изучение экспрессии хондроцитарных маркёров подтвердило, что клетки в хондросферах сохраняют хондроцитарный фенотип. Исследование жизнеспособности клеток в составе хондросфер при различных условиях хранения показало, что наиболее благоприятной средой для сохранения жизнеспособности клеток в препарате являлись фосфатно-солевой буфер и 0,9% раствор хлорида натрия (р <0,05). Метаболическая активность клеток, составляющих хондросферы, сохранялась в процессе хранения при температуре +4 °C до трёх суток (р <0,05).
Заключение. Показано, что для хранения и транспортировки прототипа хрящевого имплантата в виде хондросфер наиболее предпочтительной средой является изотонический раствор, а условием для сохранения жизнеспособности — температурный режим +4 °C в течение не более двух суток.
![pages](/img/style/pages.png)
![views](/img/style/views.png)
![](/img/style/loadingSmall.gif)
Персонализированная оценка эффективности таргетных препаратов для терапии муковисцидоза у пациента с редкими вариантами гена CFTR с.264_268delATATT и c.3139+1G>C
Аннотация
Актуальность. При обнаружении у пациентов с муковисцидозом новых, чаще всего редких, вариантов гена CFTR применяют метод кишечных органоидов, который позволяет оценить остаточную функциональную активность CFTR-канала и действие таргетных препаратов для определения возможности дальнейшей патогенетической терапии. Проведение клинических исследований эффективности таргетных препаратов у пациентов с редкими вариантами гена CFTR является дорогостоящим, а группы их крайне малочисленны. Форсколиновый тест на кишечных органоидах пациента позволяет осуществить персонализированный подход при изучении редких или даже единичных вариантов гена CFTR.
Цель исследования — на культуре кишечных органоидов, полученной от пациентки с двумя редкими вариантами гена CFTR с.264_268delATATT и c.3139+1G>C изучить влияние CFTR-потенциатора ивакафтора, а также ивакафтора в сочетании с CFTR-корректорами лумакафтором, тезакафтором и элексакафтором на восстановление функциональной активности CFTR-канала.
Материалы и методы. Для оценки активности CFTR-канала применяли форсколиновый тест на кишечных органоидах и метод определения разницы кишечных потенциалов, проводили описание клинической картины у пациентки с генотипом с.264_268delATATT/c.3139+1G>C.
Результаты. In vitro показано, что генетические варианты с.264_268delATATT и c.3139+1G>C приводят к полной утрате функционального белка CFTR, при этом CFTR-модуляторы не оказывают положительного эффекта и не обеспечивают восстановления данного белка, в отличие от F508del/F508del-контроля. Тяжесть течения заболевания у ребёнка согласуется с результатами функциональных тестов.
Заключение. Оба исследованных варианта гена CFTR относятся к «тяжёлым» и вызывают полную потерю активности хлорного канала CFTR. Для вариантов с.264_268delATATT и c.3139+1G>C не обнаружены эффективные CFTR-модуляторы, поэтому в данном случае не может быть рекомендована таргетная терапия.
![pages](/img/style/pages.png)
![views](/img/style/views.png)
![](/img/style/loadingSmall.gif)
Протеомный и транскриптомный ответ скелетной мышцы человека на 12-недельную силовую тренировку
Аннотация
Обоснование. Снижение массы и функциональных возможностей скелетных мышц способствует развитию различных патологий и росту травматизма. Исследование молекулярных механизмов адаптации скелетной мышцы к силовым тренировкам, направленным на увеличение мышечной массы и силы, представляется важной задачей для медицины и спорта.
Цель исследования — оценка изменений протеомного профиля (количественный панорамный масс-спектрометрический анализ) скелетной мышцы и корреляции этих изменений с экспрессией соответствующих мРНК (секвенирование РНК) до и после 12-недельных силовых тренировок, а также с изменениями транскриптома через 8 и 24 ч после однократной силовой нагрузки одной ногой.
Материалы и методы. 10 нетренированных мужчин (возраст — 23 (20,8–25,9) года, ИМТ — 22 (20,9–25,1) кг/м2) в течение 12 нед выполняли жим платформы сидя двумя ногами (3 раза в неделю, 50–75% от максимальной произвольной силы (МПС)). После тренировок добровольцы выполняли однократную силовую нагрузку одной ногой. До и после 12 нед тренировок оценивали МПС и объём четырехглавой мышцы бедра. До и после тренировок, а также через 8 и 24 ч после однократной силовой нагрузки выполняли биопсию латеральной головки четырёхглавой мышцы бедра из нагружавшейся и контралатеральной конечностей для иммуногистохимического, протеомного (ВЭЖХ-МС/МС) и транскриптомного (РНК-секвенирование) анализа.
Результаты. 12 нед силовых тренировок увеличили МПС на 19%, объём четырёхглавой мышцы бедра — на 12%, площадь поперечного сечения волокон 2-го (быстрого) типа — на 29%, минимальный диаметр Фере волокон 2-го типа — на 10% и 1-го (медленного) типа — на 13%. Из 1174 детектированных белков 24 увеличили содержание, 83 понизили. Силовые тренировки привели к росту экспрессии 142 и уменьшению — 65 из 12 112 детектированных мРНК с обогащением функциональных терминов внеклеточной среды, матрикса, базальной мембраны и других. Установлено изменение содержания 433 мРНК через 8 ч и 639 мРНК — через 24 ч при сопоставлении однократно нагружавшейся мышцы с контралатеральной (гены, ассоциированные с сократительной активностью). Изменения содержания лишь малой части белков (5–9 из 107) коррелировали с изменениями соответствующих мРНК.
Заключение. Протеомный анализ показал, что 12-недельная силовая тренировка оказала слабое влияние на относительное содержание высокопредставленных белков в мышце. Прирост мышечной массы, вызванный тренировкой, по-видимому, объясняется одинаковым изменением скорости синтеза/деградации детектированных белков. Сопоставление протеомных данных с изменениями экспрессии мРНК после 12-недельной тренировки, а также через 8 и 24 ч после однократной нагрузки (ответ генов, специфический для сократительной активности) показало, что изменение содержания белков, вызванное силовой тренировкой, регулируется преимущественно на посттранскрипционном уровне.
![pages](/img/style/pages.png)
![views](/img/style/views.png)
![](/img/style/loadingSmall.gif)
Создание клеточной модели на основе индуцированных плюрипотентных стволовых клеток для изучения функций гена UBE2A
Аннотация
Обоснование. Белок UBE2A относится к семейству E2 убиквитин-связывающих ферментов, которые участвуют в процессе убиквитинирования белков-субстратов. Известно, что мутации гена UBE2A связаны с синдромом врождённой Х-сцепленной умственной отсталости типа Насименто. До сих пор остаётся неизвестным, каким образом дисфункция гена UBE2A приводит к нарушению развития центральной нервной системы.
Цель исследования — создание клеточной модели на основе индуцированных плюрипотентных стволовых клеток (ИПСК) для изучения молекулярных и клеточных функций гена UBE2A в нейрогенезе.
Методы. Используя геномное CRISPR-Cas9-редактирование и лентивирусную трансдукцию, мы создали клеточную модель на основе ИПСК двух здоровых доноров, включающую изогенные ИПСК с нокаутом и индуцибельной гиперэкспрессией гена UBE2A. Дополнительно к изогенным системам мы получили линию ИПСК путём репрограммирования мононуклеаров периферической крови пациента, которому поставлен диагноз Х-сцепленной умственной отсталости типа Насименто и у которого выявлена делеция, целиком захватывающая локус гена UBE2A.
Результаты. Полученные ИПСК демонстрируют морфологию, подобную эмбриональным стволовым клеткам. Они экспрессируют маркёры плюрипотентных клеток OCT4, SOX2, SSEA-4 и TRA-1-81 и имеют нормальный кариотип. Обнаружено, что у ИПСК с нокаутом или гиперэкспрессией гена UBE2A происходит статистически значимое увеличение размера клеточного ядра по сравнению с изогенным контролем.
Заключение. Созданная клеточная модель на основе ИПСК может быть использована для фундаментальных исследований функций гена UBE2A в нейрогенезе.
![pages](/img/style/pages.png)
![views](/img/style/views.png)
![](/img/style/loadingSmall.gif)