ОПТИМИЗАЦИЯ ТЕХНОЛОГИИ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ ДЕРМАЛЬНЫХ ФИБРОБЛАСТОВ ДЛЯ ТЕРАПЕВТИЧЕСКИХ ЦЕЛЕЙ С ПОМОЩЬЮ РОБОТИЗИРОВАННОЙ СТАНЦИИ
- Авторы: Фадеев Ф.А1, Улитко М.В1, Луговец Д.В1, Леонтьев С.Л1, Сазонов С.В1
-
Учреждения:
- Институт медицинских клеточных технологий
- Выпуск: Том 11, № 3 (2016)
- Страницы: 108-112
- Раздел: Статьи
- Статья получена: 05.01.2023
- Статья опубликована: 15.09.2016
- URL: https://genescells.ru/2313-1829/article/view/120602
- DOI: https://doi.org/10.23868/gc120602
- ID: 120602
Цитировать
Полный текст
Открытый доступ
Доступ предоставлен
Доступ платный или только для подписчиков
Аннотация
Возможности роботизированной станции по культивированию и пересеву клеточных линий CompacT SelecT (TAP Biosystems, Великобритания) позволяют использовать ее для экспансии дермальных фибробластов, показанных для клинического применения. Автоматизация культивирования клеток требует оптимизации этого процесса, в том числе подбора наиболее подходящей исходной дозы фибробластов и определения времени достижения клеточным монослоем оптимальной плотности для пересева. Цель работы - определение оптимальных параметров пассирования дермальных фибробластов для стандартизации протокола их автоматизированного культивирования с помощью роботизированной станции CompacT SelecT. Дермальные фибробласты человека были получены из фрагментов кожи доноров методом ферментативной диссоциации. В качестве показателя пролиферативной активности использовали индекс пролиферации. Изменение скорости пролиферации в зависимости от плотности клеточного монослоя определяли по среднесуточному количеству делений на одну клетку. Влияние посевной дозы (от 50 до 1,2х104 кл/см2) на пролиферативную активность фибробластов оценивали в разные сроки эксперимента (3, 5, 7 и 9 сут. культивирования). Была установлена обратная зависимость пролиферативной активности фибробластов от величины посевной дозы и показано резкое снижение скорости пролиферации фибробластов после достижения клеточным монослоем плотности 3,5-4,5х104 кл/см2. В результате проведенного исследования было обнаружено, что оптимальная исходная доза фибробластов составляет 3х103 кл/см2, а наиболее подходящая для проведения дальнейшего пересева плотность монослоя - 3,5х104 кл/см2. В посевах с высокой исходной плотностью (1,2х104кл/см2) при достижении клеточным монослоем критической плотности на 7 сут. наблюдалась гибель части клеток, что сопровождалось возобновлением роста клеточной популяции на 9 сут. культивирования. Данный феномен может объясняться селекцией клеток, способных существовать в условиях повышенной плотности монослоя.
Полный текст
Об авторах
Ф. А Фадеев
Институт медицинских клеточных технологийЕкатеринбург, Россия
М. В Улитко
Институт медицинских клеточных технологийЕкатеринбург, Россия
Д. В Луговец
Институт медицинских клеточных технологийЕкатеринбург, Россия
С. Л Леонтьев
Институт медицинских клеточных технологийЕкатеринбург, Россия
С. В Сазонов
Институт медицинских клеточных технологийЕкатеринбург, Россия
Список литературы
- Алексеев А.А., Попов С.В. Современные методы трансплантации культивированных клеток кожи и ее эквивалентов при лечении ожогов. Комбустиология 1999; 1: 22-5.
- Зорин В.Л., Зорина А.И., Петракова О.С. и др. Дермальные фибробласты для лечения дефектов кожи. Клеточная трансплантология и тканевая инженерия 2009; IV (4): 26-40.
- Фадеев Ф.А., Сергеев А.Г. Использование первичных клеточных культур для лечения ожогов кожи. Вестник уральской медицинской академической науки 2013; 46(4): 134-7.
- Mehrabani D., Manafi N. Role of cultured skin fibroblasts in aesthetic and plastic surgery. World J. Plast. Surg. 2013; 2(1): 2-5.
- Moravvej H., Rad M., Toossi P. et al. Development of an allogeneic cultured dermal substitute using a standard human fibroblast bank. Iranian J. Dermatology 2009; 12(4): 111-6.
- Келлер Г., Себастиан Дж., Лакомбе Ю. и др. Сохранность инъецируемых аутологичных человеческих фибробластов. Бюллетень экспериментальной биологии и медицины 2000; 130(8): 203-6.
- Thomas R., Chandra A., Liu Ya. et al. Manufacture of a human mesenchymal stem cell population using an automated cell culture platform. Cytotechnology 2007; 55: 31-9.
- Фадеев Ф.А., Луговец Д.В., Улитко М.В. Возможности использования технологии автоматизированного культивирования при получении клеточных линий для терапевтического применения. В: С.Л. Леонтьев, редактор. Материалы IV межрегиональной научнопрактической конференции «Клеточные технологии практическому здравоохранению»; 2015 21-23 октября; Екатеринбург, Россия. Екатеринбург: Изд-во Вестник Уральской медицинской академической науки; 2015. с. 57-62.
- Takashima A. Establishment of fibroblast cultures. In: Bonifacino J., Harford J., Lippincott-Schwartz J. et al., editors. Curr. Protoc. Cell Biol.; Chapter 2: Unit 2.1. Hoboken, N.J., USA: John Wiley & Sons, Inc.; 2001. p. 2.1.1-12.
- Kenagy R., Bierman E., Schwartz S. Regulation of low-density lipoprotein metabolism by cell density and proliferative state. J. Cell Physiol. 1983; 116(3): 404-8.
- Heit I., Wieser R., Herget T. et al. Involvement of protein kinase CS in contact-dependent inhibition of growth in human and murine fibroblasts. Oncogene 2001; 20: 5143-54.
- Moldaver M., Yegorov Y.E. Sparse plating increases the heterogeneity of proliferative potential of fibroblasts. Mechanisms of Ageing and Development 2009; 130: 337-42.
- Masur S., Dewal H., Dinh T. et al. Myofibroblasts differentiate from fibroblasts when plated at low density. PNAS USA 1996; 93: 4219-23.
Дополнительные файлы
