Трансфекция клеток НЕК293 и мультипотентных мезенхимных стромальных клеток человека in vitro плазмидами с помощью высокомолекулярного полиэтиленимина

В настоящее время большое значение уделяют стимуляции регенеративных процессов в организме. Одно из перспективных направлений - разработка методов генно-клеточной терапии. В основе подхода лежит генетическая модификация клеток in vitro и ex vivo для коррекции генетического дефекта или для повышения экспрессии рекомбинантных терапевтических биомолекул. Затем генетически модифицированные клетки могут быть трансплантированы пациенту для лечения широкого спектра дегенеративных и ишемических заболеваний. Применение плазмидных экспрессионных векторов - один из наиболее биологически безопасных подходов для генетической модификации клеток. Основной недостаток плазмид - низкая эффективность трансфекции и высокая стоимость химических транс-фекционных препаратов. Кроме того, трансфекционные препараты зачастую обладают выраженной цитоток-сичностью. Отдельную проблему представляет низкая
эффективность трансфекции мультипотентных мезенхимных стромальных клеток (ММСЮ).
Полиэтиленимины (polyethyleneimine, PEI) - нано-размерные положительно заряженные (катионные) частицы, состоящие из синтетического полимера - продукта полимеризации этиленимина. PEI способны конденсировать нуклеиновые кислоты и эффективно проникать внутрь клетки. Для трансфекции клеток чаще всего применяют низкомолекулярные PEI [например 25 000 кДа]. Однако низкомолекулярные PEI обладают относительно высокой цитотоксичностью по сравнению с высокомолекулярными PEL Кроме того, на сегодняшний день недостаточно исследован вопрос применения высокомолекулярных PEI для трансфекции стволовых клеток человека, в частности ММСК.
Задачи исследования: оценить эффективность трансфекции клеток НЕК293 и ММСК плазмидами, экспрессирующими репотерные белки LacZ [#β-галактозидаза] и GFP [зелёный флуоресцентный белок], с помощью высокомолекулярного PEL