АнАлиз внутриклеточной локАлизАции конъюгАтА рекомбинАнтного гистонА H1.3 с фотоАктивируемым флуоресцентным крАсителем
- Авторы: Шапошников М.Н1, Соловьева Д.О1, Зайцев С.Ю1, Соловьева В.В2,3, Салафутдинов И.И2,3, Ризванов А.А2,3
-
Учреждения:
- Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии им. К.И. Скрябина
- Казанский (Приволжский) федеральный университет
- Национальный исследовательский ядерный университет «МИФИ»
- Выпуск: Том 9, № 3 (2014)
- Страницы: 289-294
- Раздел: Статьи
- Статья получена: 05.01.2023
- Статья опубликована: 15.12.2014
- URL: https://genescells.ru/2313-1829/article/view/120370
- DOI: https://doi.org/10.23868/gc120370
- ID: 120370
Цитировать
Полный текст
Открытый доступ
Доступ предоставлен
Доступ платный или только для подписчиков
Аннотация
Гистонные белки являются перспективными носителями для доставки рекомбинантных нуклеиновых кислот в различные культуры клеток. Получение конъюгатов таких белков с флуоресцентными красителями является современным инструментом в исследовании клеточного транспорта и внутриклеточного распределения важных биополимеров. Целью данной работы являлась оптимизация методики конъюгации рекомбинантного гистона H1.3 и фотоактиви-руемого флуоресцентного красителя, исследование проникновения полученного конъюгата в клетки и определение его внутриклеточной локализации. В ходе работы оптимизирована методика получения конъюгата, способного интенсивно флуоресцировать в красной области спектра, после облучения фиолетовым светом. Определена степень конъюгации при разных условиях. Проведено сравнение цитотоксичности гистона Н1.3 и его конъюгата с фотоакти-вируемым флуоресцентным красителем (ФФК) в культуре клеток HeLa, а также его внутриклеточная локализация. Обнаружено, что коньюгаты в значительной степени концентрируются в рециркулирующих эндосомах, в меньшей степени - в пероксисомах. Таким образом, полученный конъюгат рекомбинантного гистона Н1.3 с ФФК может быть в дальнейшем использован для исследований его противоопухолевого действия и как носителя для доставки лекарственных препаратов и нуклеиновых кислот в клетки человека и животных.
Полный текст
Об авторах
М. Н Шапошников
Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии им. К.И. Скрябина
Д. О Соловьева
Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии им. К.И. Скрябина
С. Ю Зайцев
Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии им. К.И. Скрябина
В. В Соловьева
Казанский (Приволжский) федеральный университет; Национальный исследовательский ядерный университет «МИФИ»
И. И Салафутдинов
Казанский (Приволжский) федеральный университет; Национальный исследовательский ядерный университет «МИФИ»
А. А Ризванов
Казанский (Приволжский) федеральный университет; Национальный исследовательский ядерный университет «МИФИ»
Список литературы
- Соловьева В.В., Кудряшова Н.В., Ризванов А.А. Перенос рекомбинантных нуклеиновых кислот в клетки (трансфекция) с помощью гистонов и других ядерных белков. Клеточная Трансплантология и Тканевая Инженерия 2011; 6(3): 29-40.
- Соловьева В.В., Исаев А.А., Генкин Д.Д. и др. Влияние рекомбинантного гистона Н1.3 на эффективность лентивирусной трансдукции клеток человека in vitro. Клеточная трансплантология и тканевая инженерия 2012; 7(3): 151-4.
- Belov V.N., Wurm C.A., Boyarskiy V.P. et al. Rhodamines NN: a novel class of caged fluorescent dyes. Angew. Chem. Int. Ed. Engl. 2010; 49(20): 3520-3.
- Зайцев С.Ю., Шапошников М.Н., Свирщевская Е.В. Окрашивание клеток новыми фотоактивируемыми флуоресцентными красителями. Ветеринарная медицина 2010; 3: 32-4.
- Шапошников М.Н., Чудаков Д.Б., Генералов А.А. и др. Получение конъюгата хитозана с фотоактивируемым флуоресцентным красителем и его применение в клеточной микроскопии. Ветеринарная медицина. 2012; 3-4: 32-5.
- Lidke D.S., Wilson B.S. Caught in the act: quantifying protein behaviour in living cells. Trends Cell Biol. 2009; 19(11): 566-74.
- Lippincott-Schwartz J., Snapp E., Kenworthy A. Studying protein dynamics in living cells. Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 2001; 2(6): 444-56.
- Neher R.A., Mitkovski M., Kirchhoff F. et al. Blind source separation techniques for the decomposition of multiply labeled fluorescence images. Biophys. J. 2009; 96(9): 3791-800.
- Betzig E., Patterson G.H., Sougrat R. et al. Imaging intracellular fluorescent proteins at nanometer resolution. Science 2006; 313(5793): 1642-5. финансировалась грантом РФФИ 13-04-97099. Рекомбинантный гистон Н1.3 предоставлен ОАО «Институт стволовых клеток человека». Работа частично выполнена на оборудовании междисциплинарного центра аналитической микроскопии (директор Осин Ю.Н., оператор Кузнецова С.В,) и Научно-образовательного центра фармацевтики Казанского (Приволжского) федерального университета.
- Hess S.T., Girirajan T.P., Mason M.D. Ultra-high resolution imaging by fluorescence photoactivation localization microscopy. Biophys. J. 2006; 91(11): 4258-72.
- Rust M.J., Bates M., Zhuang X. Sub-diffraction-limit imaging by stochastic optical reconstruction microscopy (STORM). Nat. Methods. 2006; 3(10): 793-5.
- Шапошников М.Н., Зайцев С.Ю., Чудаков Д.Б. и др. Определение локализации нового фотоактивируемого флуоресцентного красителя в культуре клеток A431 с помощью селективных флуоресцентных зондов. Учен. За. Казан. Гос. Акад. Вет. Мед. им. Н.Э. Баумана. 2013; 214: 483-8.
- Шапошников М.Н., Чудаков Д.Б., Генералов А.А. и др. Зависимость флуоресценции нового фотоактивируемого красителя от параметров среды. Фундаментальные исследования 2012; 9(2): 322-7.
- Zaitsev S.Y., Shaposhnikov M.N., Solovyeva D.O. et al. Novel precursors of fluorescent dyes. 1. Interaction of the dyes with model phospholipid in monolayers. Cell Biochem. Biophys. 2013; 67(3): 1365-70.
- Zaitsev S.Y., Shaposhnikov M.N., Solovyeva D.O. et al. Cell Staining by Novel Derivatives of Fluorescent Rhodamine Dyes. World Appl. Sci. J. 2013; 26(6): 712-8.
- Goedhart J., von Stetten D., Noirclerc-Savoye M. et al. Structure-guided evolution of cyan fluorescent proteins towards a quantum yield of 93%. Nat. Commun. 2012; 3: 751.
- Choudhury A., Dominguez M., Puri V. et al. Rab proteins mediate Golgi transport of caveola-internalized glycosphingolipids and correct lipid trafficking in Niemann-Pick C cells. J. Clin. Invest. 2002; 109(12): 1541-50.
Дополнительные файлы
