Intracellular localization analysis of a conjugate of recombinant histone H1.3 with photoactivated fluorescent dye



Дәйексөз келтіру

Толық мәтін

Ашық рұқсат Ашық рұқсат
Рұқсат жабық Рұқсат берілді
Рұқсат жабық Рұқсат ақылы немесе тек жазылушылар үшін

Аннотация

Histone proteins are promising carriers for delivery of recombinant nucleic acids in various cell cultures. Conjugates of proteins with fluorescent dyes are modern tools in the study of cellular transport and intracellular distribution of important biopolymers. The aim of this work was to optimize the method of recombinant histone H1.3 conjugation with photoactivatable fluorescent dye. Also we studied intracellular penetration and subcellular localization of the resulting conjugate. Resulting conjugate was capable of intensive fluorescence in the red region of the spectrum after irradiation with violet light. The degree of conjugation was determined under different reaction conditions. A comparison of the cytotoxicity of histone H1.3 and its conjugate with photoactivated fluorescent dye in HeLa cells and its intracellular localization was characterized. We found that conjugates mainly localize in recycling endosomes and to a lesser extent in peroxisomes. Thus, the resulting conjugate of recombinant histone H1.3 with photoactivatable fluorescent dye can be used for further studies its anticancer activity and as carrier for drugs and nucleic acids delivery into human and animal cells.

Толық мәтін

Рұқсат жабық

Авторлар туралы

M. Shaposhnikov

K.I. Skryabin Moscow State Academy of Veterinary Medicine and Bionanotechnology

D. Solovyeva

K.I. Skryabin Moscow State Academy of Veterinary Medicine and Bionanotechnology; National Research Nuclear University «MEPI»

S. Zaitsev

K.I. Skryabin Moscow State Academy of Veterinary Medicine and Bionanotechnology

V. Solovyeva

Kazan (Volga region) Federal University

I. Salafutdinov

Kazan (Volga region) Federal University

A. Rizvanon

Kazan (Volga region) Federal University

Әдебиет тізімі

  1. Соловьева В.В., Кудряшова Н.В., Ризванов А.А. Перенос рекомбинантных нуклеиновых кислот в клетки (трансфекция) с помощью гистонов и других ядерных белков. Клеточная Трансплантология и Тканевая Инженерия 2011; 6(3): 29-40.
  2. Соловьева В.В., Исаев А.А., Генкин Д.Д. и др. Влияние рекомбинантного гистона Н1.3 на эффективность лентивирусной трансдукции клеток человека in vitro. Клеточная трансплантология и тканевая инженерия 2012; 7(3): 151-4.
  3. Belov V.N., Wurm C.A., Boyarskiy V.P. et al. Rhodamines NN: a novel class of caged fluorescent dyes. Angew. Chem. Int. Ed. Engl. 2010; 49(20): 3520-3.
  4. Зайцев С.Ю., Шапошников М.Н., Свирщевская Е.В. Окрашивание клеток новыми фотоактивируемыми флуоресцентными красителями. Ветеринарная медицина 2010; 3: 32-4.
  5. Шапошников М.Н., Чудаков Д.Б., Генералов А.А. и др. Получение конъюгата хитозана с фотоактивируемым флуоресцентным красителем и его применение в клеточной микроскопии. Ветеринарная медицина. 2012; 3-4: 32-5.
  6. Lidke D.S., Wilson B.S. Caught in the act: quantifying protein behaviour in living cells. Trends Cell Biol. 2009; 19(11): 566-74.
  7. Lippincott-Schwartz J., Snapp E., Kenworthy A. Studying protein dynamics in living cells. Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 2001; 2(6): 444-56.
  8. Neher R.A., Mitkovski M., Kirchhoff F. et al. Blind source separation techniques for the decomposition of multiply labeled fluorescence images. Biophys. J. 2009; 96(9): 3791-800.
  9. Betzig E., Patterson G.H., Sougrat R. et al. Imaging intracellular fluorescent proteins at nanometer resolution. Science 2006; 313(5793): 1642-5. финансировалась грантом РФФИ 13-04-97099. Рекомбинантный гистон Н1.3 предоставлен ОАО «Институт стволовых клеток человека». Работа частично выполнена на оборудовании междисциплинарного центра аналитической микроскопии (директор Осин Ю.Н., оператор Кузнецова С.В,) и Научно-образовательного центра фармацевтики Казанского (Приволжского) федерального университета.
  10. Hess S.T., Girirajan T.P., Mason M.D. Ultra-high resolution imaging by fluorescence photoactivation localization microscopy. Biophys. J. 2006; 91(11): 4258-72.
  11. Rust M.J., Bates M., Zhuang X. Sub-diffraction-limit imaging by stochastic optical reconstruction microscopy (STORM). Nat. Methods. 2006; 3(10): 793-5.
  12. Шапошников М.Н., Зайцев С.Ю., Чудаков Д.Б. и др. Определение локализации нового фотоактивируемого флуоресцентного красителя в культуре клеток A431 с помощью селективных флуоресцентных зондов. Учен. За. Казан. Гос. Акад. Вет. Мед. им. Н.Э. Баумана. 2013; 214: 483-8.
  13. Шапошников М.Н., Чудаков Д.Б., Генералов А.А. и др. Зависимость флуоресценции нового фотоактивируемого красителя от параметров среды. Фундаментальные исследования 2012; 9(2): 322-7.
  14. Zaitsev S.Y., Shaposhnikov M.N., Solovyeva D.O. et al. Novel precursors of fluorescent dyes. 1. Interaction of the dyes with model phospholipid in monolayers. Cell Biochem. Biophys. 2013; 67(3): 1365-70.
  15. Zaitsev S.Y., Shaposhnikov M.N., Solovyeva D.O. et al. Cell Staining by Novel Derivatives of Fluorescent Rhodamine Dyes. World Appl. Sci. J. 2013; 26(6): 712-8.
  16. Goedhart J., von Stetten D., Noirclerc-Savoye M. et al. Structure-guided evolution of cyan fluorescent proteins towards a quantum yield of 93%. Nat. Commun. 2012; 3: 751.
  17. Choudhury A., Dominguez M., Puri V. et al. Rab proteins mediate Golgi transport of caveola-internalized glycosphingolipids and correct lipid trafficking in Niemann-Pick C cells. J. Clin. Invest. 2002; 109(12): 1541-50.

Қосымша файлдар

Қосымша файлдар
Әрекет
1. JATS XML
Жүктеу

© Eco-Vector, 2014


СМИ зарегистрировано Федеральной службой по надзору в сфере связи, информационных технологий и массовых коммуникаций (Роскомнадзор).
Регистрационный номер и дата принятия решения о регистрации СМИ: 

Осы сайт cookie-файлдарды пайдаланады

Біздің сайтты пайдалануды жалғастыра отырып, сіз сайттың дұрыс жұмыс істеуін қамтамасыз ететін cookie файлдарын өңдеуге келісім бересіз.< / br>< / br>cookie файлдары туралы< / a>