Comparison of effects of bone marrow different cells intramyocardial autotransplantation on reparation of rabbit myocardium after infarction

A. A. Matyukov; Матюков А. А.; N. V. Tsupkina; Цупкина Н. В.; T. D. Vlasov; Власов Т. Д.; V. V. Gritsenko; Гриценко В. В.; V. V. Davydenko; Давыденко В. В.; A. N. Yalfimov; Ялфимов А. Н.; G. P. Pinaev; Пинаев Г. П.

Comparison of effects of bone marrow different cells intramyocardial autotransplantation on reparation of rabbit myocardium after infarction

Authors: Matyukov A.A.¹, Tsupkina N.V.², Vlasov T.D.¹, Gritsenko V.V.¹, Davydenko V.V.¹, Yalfimov A.N.¹, Pinaev G.P.²
Affiliations:
1. Pavlov State Medical University of Saint-Petersburg
2. Institute of Cytology RAS
Issue: Vol 2, No 1 (2007)
Pages: 48-53
Section: Original Study Articles
Submitted: 03.02.2023
Accepted: 03.02.2023
Published: 15.03.2007
URL: https://genescells.ru/2313-1829/article/view/182844
ID: 182844

Cite item

Full Text

Abstract

The article represents the results of comparative estimation of effects of intramyocardial autotransplantation of bone marrow pluripotent mesenchymal stromal cells and nucleated cell on reparation of myocardium after infarction. Rabbits of the Chinchilla species were used in the experiments. Myocardial infarction was modeled by ligating the anterior descending branch of the left coronary artery. The results were assessed by a scar tissue area and the index of left ventricle dilatation in 12 months after cells transplantation. To evaluate an extend of myocardial infarction the cells were stained with 1, 3, 5, tripheniltetrasole chloride. There were three groups of animals. Into the affected* zone of the 1^st group animals (control, n=13) α-МЕМ medium was injected; to the animals of the 2^nd group (n=14) the culture of pluripotent mesenchymal stromal cells of bone marrow was introduced (2x10⁶), the 3-rd group animals (n=14) were given bone marrow nucleated cells (2x10⁶). It has been shown that transplantation of pluripotent mesenchymal stromal cells of bone marrow reduces a scar area and left ventricle dilatation as compared with the control. Bone marrow nucleated cells having been transplanted, the necrosis extends, scar area increases, every cardiac chamber substantially dilates.

Keywords

myocardial infarction, pluripotent mesenchymal stromal cells, nucleated cells, bone marrow, dilatation of left ventricle

Full Text

Введение

Сердечно-сосудистые заболевания продолжают занимать ведущее место среди причин инвалидности и смертности населения в экономически развитых странах [1]. Высокий уровень летальности во многом определяется особенностями регенерации миокарда. В организме взрослых млекопитающих гибель и замещение дифференцированных клеток происходит по-разному. Эти процессы могут осуществляться либо путем деления дифференцированных клеток с образованием потомков идентичного гено- и фенотипа (гепатоциты), либо путем замещения погибших дифференцированных клеток потомками недифференцированных ранних предшественников (клетки крови) [2]. У человека на поздних стадиях онтогенеза кардиомиоциты утрачивают способность к регенерации. В результате этого погибшие в ходе инфаркта кардиомиоциты замещаются соединительной тканью, что, в конечном итоге, приводит к нарушению функции сердца [3].

Новый терапевтический подход для предотвращения развития сердечной недостаточности основан на использовании живых клеток, подвергнутых обработке или модификации вне организма. Среди методов клеточной трансплантации наибольшую популярность получила аутотрансплантация мультипотентных мезенхимных стромальных клеток костного мозга и ядросодержащих клеток костного мозга [4]. Растущее число экспериментальных работ демонстрирует положительный эффект трансплантации этих клеток на регенерацию поврежденного миокарда [5].

Цель работы

Сравнить влияние аутотрансплантации мультипотентных мезенхимных стромальных клеток (ММСК) костного мозга и ядросодержащих клеток (ЯСК) костного мозга на репарацию миокарда кроликов после инфаркта.

Материалы и методы

Эксперименты проведены на кроликах-самцах породы Шиншилла массой 2,7-3,0 кг. Возраст животных к началу эксперимента составлял 3-4 месяца.

1. Получение мультипотентных мезенхимных стромальных клеток и ядросодержащих клеток костного мозга

В работе использовали культуру ММСК и ЯСК, полученных из аспирата костного мозга.

Аспират костного мозга получали путем пункции крыла подвздошной кости после премедикации (дроперидол 0,5 мг/кг, ксилазин 14 мг/кг) под местным обезболиванием 0,5% раствором новокаина. Аспират в количестве 10 мл помещали в пробирку, содержащую антикоагулянт CPDS (citrate phosphate dextrose solution). Полученный костный мозг фракционировали с помощью центрифугирования (1600g, 20 мин) в градиенте плотности Перколла (63%). Образовавшееся интерфазное кольцо с ЯСК костного мозга промывали в растворе Хенкса без Са²⁺ и Мg²⁺и осаждали центрифугированием. Осадок суспендировали в среде α-МЕМ и использовали либо для дальнейшего культивирования, либо для трансплантации без культивирования.

Жизнеспособность ЯСК костного мозга определяли в камере Горяева с помощью окраски трипановым синим.

Клетки культивировали в среде α-МЕМ (ICN, США) с 10% сыворотки эмбрионов коров (Hyclone, Новая Зеландия) и гентамицина сульфата (50 мкг/мл) в СО₂-инкубаторе при 5 % концентрации углекислого газа. Смену среды производили через каждые трое суток. После первой смены среды в нее добавляли аскорбиновую кислоту (50 мкг/мл). Клетки, достигшие субконфлюэнтного состояния, пересевали при помощи раствора трипсина и ЭДТА (Gibco, США).

Характеристику клеточных культур проводили путем окрашивания стандартной смесью реактивов BCIP-NBT (Sigma, США) на щелочную фосфатазу (ЩФ) для идентификации клеток остеогенной дифференцировки и суданом-III (BDH Chemicals Ltd, Англия) для идентификации клеток адипоцитарной дифференцировки.

2. Моделирование инфаркта миокарда

Для моделирования инфаркта миокарда кроликам после премедикации (дроперидол 0,5 мг/кг, метацин 0,8 мг/кг) и эндотрахеальной интубации в условиях искусственной вентиляции легких под управляемым наркозом (кетамин 32 мг/кг, ксилазин 14 мг/кг, дитилин 3 мг/кг) в четвертом межреберье слева выполнялась торакотомия. Затем осуществлялась перикардиотомия и перевязка передней нисходящей ветви левой коронарной артерии на расстоянии 1,0 см от верхушки сердца (рис. 1). Сразу после коронароокклюзии в зону предполагаемого инфаркта интрамиокардиально с помощью инсулинового шприца вводили клетки или эквивалентное количество ростовой среды (рис. 2). Рану послойно ушивали, пневмоторакс ликвидировали путем активной аспирации воздуха из плевральной полости. Интраоперационная летальность составила 10%, послеоперационная - менее 2%.

Рис. 1. Лигирование передней нисходящей ветви левой коронарной артерии

Рис. 2. Введение клеток в ишемизированную зону миокарда левого желудочка

3. Окрашивание клеток

Окрашивание клеточных культур и ЯСК костного мозга проводили с помощью флуорохрома Hoechst (Sigma, США) в концентрации 1 мкг/мл. Для обнаружения меченых клеток часть животных в каждой экспериментальной группе выводили из эксперимента через 20 суток, данный срок был обусловлен длительностью функционирования метки. Идентификацию окрашенных клеток осуществляли после ферментативной обработки миокарда смесью трипсин-кол-лагеназы (Sigma, США). Меченые клетки выявляли с помощью флуоресцентного микроскопа «Axioscop» (Zeiss, Германия).

4. Определение размера экспериментального инфаркта миокарда и дилатации левого желудочка

Для определения размера инфаркта миокарда в эксперименте использовали методику окрашивания 1,3,5-трифе-нилтетразолием хлоридом (ТТС), позволяющую на макроскопическом уровне отграничить необратимо поврежденную ткань миокарда от ткани, сохранившей жизнеспособность. У животных сразу после эвтаназии (через 12 месяцев после трансплантации клеток) извлекали сердце, промывали физиологическим раствором и разрезали в поперечном направлении с помощью специального устройства на 3 сегмента одинаковой толщины (рис. 3), плегический раствор не использовали, так как сердце во всех группах эксперимента подвергалось равнозначной контракции. Затем срезы помещали в 1% раствор ТТС (ICN, США), окрашивающий жизнеспособный миокард с сохраненной активностью НАД-зависимых ферментов в ярко-красный (кирпичный) цвет, и инкубировали в течение 15 минут при температуре 37°C и рН 7,4. Окрашенные срезы миокарда фотографировали с базальной поверхности цифровой камерой Olimpus 2020. Общую площадь рубца вычисляли по трем срезам и представляли в процентном отношении от площади среза.

Рис. 3. Разделение сердца на сегменты

Дилатацию левого желудочка рассчитывали, как отношение площади просвета к площади миокарда.

Все эксперименты на животных выполнены в соответствии с требованиями этического комитета СПбГМУ им. акад. И.П. Павлова.

Результаты исследования

В результате культивирования клеток, выделенных из аспирата костного мозга, была получена культура ММСК. После окрашивания ММСК смесью реактивов BCIP-NBT и суданом-III окрашенных положительно клеток выявлено не было, что свидетельствовало об отсутствии спонтанной остеогенной и адипоцитарной дифференцировки.

Для изучения механизмов влияния трансплантированных клеток на репарацию ишемизированного миокарда, необходимо было определить местонахождение введенных клеток. Детекция флуоресцентно окрашенных клеток в миокарде кроликов показала их присутствие в зоне ишемического повреждения.

Все животные были разделены на 3 группы. Животным 1-й группы (контроль, n=13) в пораженную зону инъекционным способом вводилась ростовая среда α-МЕМ, животным 2-й группы (n=14) вводилась культура ММСК (2x10⁶), животным 3-й группы (n=14) - ЯСК костного мозга (2х10⁶).

Макроскопическое исследование нативных сердец кроликов контрольной группы (без лечения) показало значительное увеличение размеров сердца и наличие выраженной аневризмы левого желудочка по сравнению со здоровым сердцем (неоперированные животные). В сердцах кроликов, которым выполнялась трансплантация ММСК, на передней стенке левого желудочка выявлялись рубцовые изменения, размеры сердца были незначительно увеличены. В группе животных, которым осуществляли трансплантацию ЯСК, размеры сердца значительно превышали размеры здорового сердца, а левый желудочек был аневризматически изменен (рис. 4).

Рис. 4. Сердце здорового (неоперированного) и опытных кроликов через 12 месяцев после эксперимента: А - аневризма, Р - рубец, ЛЖ - левый желудочек

Результаты определения площади рубца после окрашивания срезов сердца кролика ТТС показали, что в контрольной группе площадь рубца составила 20,2±1,9%. В опытных группах максимальные изменения были выявлены в группе животных, которым выполнялась трансплантация ЯСК костного мозга: общая площадь рубца составила 35,8±1,6%. Положительные изменения были отмечены после трансплантации культуры ММСК - площадь рубцовой ткани в этих сердцах соответствовала 6,0±2,6% (рис. 5, 6).

Рис. 5. Срезы сердец кроликов контрольной и опытных групп: ЛЖ - левый желудочек, ПЖ - правый желудочек. Стрелками обозначен рубец. Окраска 1,3,5-трифенилтетразолием хлоридом

Рис. 6. Площадь рубца в контрольной группе, после трансплантации ММСК (группа 2) и ЯСК костного мозга (группа 3). Примечание: р<0,001 в сравнении с контрольной группой

Результаты определения индекса дилатации левого желудочка показали, что в группе животных, которым интрамиокардиально трансплантировали ЯСК костного мозга, этот показатель в 2 раза превышал значения контрольной группы (0,34±0,03 и 0,19±0,02). Индекс дилатации левого желудочка сердец кроликов, перенесших трансплантацию ММСК, был в 2 раза меньше по сравнению с контрольной группой и составил 0,11±0,02 (рис. 7).

Рис. 7. Индекс дилатации левого желудочка в контрольной группе, после трансплантации ММСК (группа 2) и ЯСК костного мозга (группа 3). Примечание: р<0,001 в сравнении с контрольной группой

Обсуждение результатов

Представленные результаты показывают, что интрамиокардиальная трансплантация ММСК костного мозга приводит к положительным изменениям в поврежденном миокарде, что проявляется в уменьшении площади рубца и дилатации левого желудочка по сравнению с контрольной группой. D. Orlic et al. (2001) показали, что недифференцированные ММСК обладают тропностью к поврежденным тканям и при трансплантации в зону альтерации активно участвуют в репаративных процессах [6]. Эти же авторы продемонстрировали способность ММСК дифференцироваться в кардиомиоциты. ММСК вырабатывают некоторые гемопоэтические и негемопоэтические ростовые факторы, интерлейкины и хемокины, а также экспрессируют рецепторы некоторых цитокинов и ростовых факторов. In vitro показано, что ММСК продуцируют цитокины: IL (interleukin)-1α, IL-1β, IL-6, IL-11, IL-12, IL-14, IL-15, рецепторы для IL-1α, IL-1β, IL-1, IL-3, IL-4, IL-7, IL-8, TNFα (tumor necrosis factor alpha) [7, 8]. Многие из этих цитокинов продуцируются конститутивно, а другие - только после стимуляции. P. Azarnous et al. (2005) продемонстрировали способность ММСК после трансплантации в поврежденный миокард крыс вырабатывать HIF-1α (hypoxia-inducible factor 1 alpha), который оказывает цитопротективное действие и ингибирует апоптоз [9]. Кроме того, ММСК могут продуцировать факторы SDF-1 (stromal cell derived factor 1), SCF (stem cell factor), G-CSF (granulocyte colony-stimulating factor), способные дополнительно вызывать мобилизацию и хоуминг ММСК костного мозга в ишемизированный миокард и пролиферацию трансплантированных ММСК [10]. SCF также обладает мощным антиапоптотическим действием, усиливает хоуминг предшественников эндо-телиоцитов из костного мозга и стимулирует пролиферацию миофибробластов [11]. Кроме того, ММСК участвуют в процессах неоангиогенеза за счет секреции ангиогенных факторов, таких как VEGF (vascular endothelial growth factor), bFGF (basic fibroblast growth factor), HGF (hepatocyte growth factor), TGF-β (transforming growth factor beta), ангиопоэ-тин-1, и экспрессии на своей поверхности рецепторов для VEGF (VEGFR2), фибронектина, ламинина, молекул адгезии ICAM-1 (intercellular adhesion molecule-1), ICAM-2 (intercellular adhesion molecule-2), VCAM-1 (vascular cell adhesion molecule-1) [12]. Вырабатываемые ММСК ангиогенные факторы способны мобилизовать прогениторные эндотелиальные клетки из костного мозга, стимулировать пролиферацию эндотелиоцитов сосудов поврежденного миокарда и вызывать дифференцировку трансплантированных в миокард ММСК в эндотелиоциты, гладкие миоциты, перициты, фибробласты, которые затем становятся компонентами сосудистой стенки [13].

Таким образом, выявленное нами положительное влияние ММСК на репарацию поврежденного миокарда можно объяснить как прямым (дифференцировка ММСК в кардиомиоциты, эндотелиоциты и другие клетки), так и опосредованным (секреция цитокинов, стимулирующих неоангиогенез, ингибирующих апоптоз и т.д.) действием.

Трансплантация ЯСК костного мозга, наоборот, приводит к ухудшению течения инфаркта миокарда, сопровождается усилением фиброза и увеличением дилатации левого желудочка с формированием выраженной аневризмы. Как известно, инфаркт миокарда сопровождается острой воспалительной реакцией, в ходе которой происходит последовательная смена спектра синтезируемых цитокинов и клеточных популяций, в конечном итоге, приводящая к заживлению и формированию рубца [14]. Введенные интрамиокардиально в зону ишемии ЯСК костного мозга, по-видимому, изменяют течение воспаления. ЯСК костного мозга представляют собой гетерогенную популяцию и содержат ММСК, прогениторные эндотелиальные клетки, гемопоэтические стволовые клетки, нейтрофилы, моноциты, лимфоциты и другие клетки крови, способные секретировать множество различных цитокинов [15]. Попадая искусственно в ишемизированный миокард, ЯСК качественно и количественно изменяют воспалительную реакцию. Трансплантированные клетки, по-видимому, начинают секретировать протеолитические ферменты и хемоаттрактанты (IL-8, monocyte chemoattractant protein-1, macrophage inflammatory protein 1 alpha, 1 beta), которые дополнительно привлекают из крови в зону альтерации гранулоциты, усиливая тем самым воспалительную реакцию [16]. Высвобождаемые протеолитические ферменты лизируют межклеточные коллагеновые сшивки и активируют матриксные металлопротеиназы. В результате каскада ферментативных реакций происходит деградации внеклеточного матрикса и расширение зоны инфаркта. В условиях повреждения кардиомиоциты начинают вырабатывать тканевые ингибиторы металлопротеиназ [17, 18]. Однако, видимо количества синтезируемых ингибиторов недостаточно для подавления активности образующихся металлопротеиназ.

Еще один механизм влияния ЯСК костного мозга на течение воспаления, по-видимому, связан с прогениторными эндотелиальными клетками. ЯСК в больших количествах секретируют ангиогенные факторы: VEGF, bFGF, TGF-β, PDGF (platelet-derived growth factor) и другие. Эти факторы стимулируют пролиферацию эндотелиоцитов сосудов поврежденного миокарда и трансплантированных прогениторных эндотелиальных клеток [19]. В результате этого трансплантированные и вновь образованные эндотелиоциты начинают синтезировать ангиотензин-11, эндотелин-1 и другие факторы, которые усиливают интерстициальный и периваскулярный фиброз [20].

Выводы

Таким образом, в ходе проведенного исследования нами было показано, что интрамиокардиальная трансплантация ММСК костного мозга приводит к выраженному положительному влиянию на репарацию ишемизированного миокарда. Трансплантация ЯСК костного мозга в острейшую фазу инфаркта миокарда не сопровождается положительными морфологическим изменениям, а, наоборот, ухудшает течение репаративных процессов.

Комментарий

И.В. Потапов кандидат медицинских наук, старший научный сотрудник лаборатории биотехнологии стволовых клеток

ГУ НИИ Трансплантологии и искусственных органов Росздрава, Москва

В настоящее время накоплен значительный (более чем 10-летний) опыт экспериментальных исследований, посвященных трансплантации клеток различных фенотипов в поврежденный миокард (клеточной кардиомиопластике). За рубежом такие работы появлялись регулярно с 1995 года, в России - с 2000 г. Первые исследования описывали применение фетальных и неонатальных кардиомиоцитов, фибробластов, а затем ЭСК и их производных. Несмотря на обнадеживающие результаты первых нескольких лет, стало очевидно, что фетальные клетки и ЭСК в перспективе не могут стать общепринятым средством в кардиологической практике, прежде всего, по этическим причинам и невозможности обеспечить должную степень безопасности биотрансплантата. Фокус исследований постепенно смещался к использованию «взрослых клеток», в основном это были миосателлитоциты скелетной мускулатуры. Очередной всплеск интереса к клеточной кардиомиопластике случился после успехов в изучении стволовых и прогениторных клетках взрослых индивидов, в частности костного мозга. Были подробно описаны мезенхиальные (стромальные) стволовые клетки, эндотелиальные прогениторные клетки и их «инкубатор» - костный мозг, был описан феномен слияния, было показано участие клеток костного мозга в реваскуляризации миокарда и его постинфарктном ремоделировании. Множество работ по клеточной кардиомиопластике появляется и по настоящее время, в них раскрываются все новые и новые аспекты сложных механизмов клеточной миграции, дифференцировки, переживания, регенерации, ангиогенеза.

В настоящее время наиболее подходящим источником клеток для трансплантации в сердце является костный мозг. Этому есть причины: относительная простота его получения и процессинга, наличие в костномозговой взвеси значительного количества стволовых и прогениторных клеток различного фенотипа, возможность аутогенного применения, отсутствие этических проблем при его использовании. Неудивительно, что к настоящему времени накоплен не только большой экспериментальный, но и клинический материал по применению клеток костного мозга в кардиологии. Однако до сих пор нет ответа на один из главных вопросов: какие клетки костного мозга эффективнее. В этом аспекте можно условно разделить исследователей на 2 лагеря. Первый (больший) склоняется к необходимости минимальных манипуляций с костным мозгом, ставя во главу угла безопасность таких методик. В результате применяется мононуклеарная фракция костного мозга, содержащая в основном клетки лимфоидного ростка. Во втором лагере находятся сторонники другого подхода, при котором необходимо целенаправленно работать с клеточным материалом, улучшая его свойства методами иммуномагнитного сортинга или культивирования. В результате становится возможным применять стандартизованные по составу клеточные препараты, в которых процент клеток-предшественников (CD34⁺, CD133⁺, мМсК) значительно выше, нежели в мононуклеарной фракции.

Результаты экспериментальных исследований показали эффективность обоих подходов. Однако везде есть «подводные камни». Например, показано, что мононуклеарная фракция может вести к кальцификации миокарда (Yoon Y.S. et al., 2004), а культивированные в течение длительного времени ММСК при определенных условиях могут вызывать опухоли (Tolar J. et al., 2007). Результаты клинических исследований также неоднозначны. Например, после интракоронарной трансплантации мононуклеарной фракции клеток костного мозга показан как положительный эффект (Perin E.C. et al., 2003), так и его отсутствие (Lunde K. et al., 2006), а также кратковременный эффект (Meyer G.P. et al., 2006). Результаты клинического применения однородных по составу клеточных препаратов пока немногочисленны, и они описывают безопасность (Stamm C. et al., 2003) и эффективность (Assmus B. et al., 2006).

Вследствие существования различных методик экспериментальных работ и разнородных по дизайну клинических исследований провести сравнительный анализ эффективности того или иного клеточного препарата не представляется возможным. Именно поэтому большое значение приобретают исследования, подобные статье А.А. Матюкова и соавт. В работе показана не только эффективность ММСК, но и отрицательное действие ядросодержащих клеток костного мозга. Очевидно, применение ядросодержащих клеток поддерживает воспалительные процессы и усиливает вторичную волну некроза миокарда, тогда как ММСК вызывает значительную перестройку процессов постинфарктного ремоделирования, что в результате приводит к значимому уменьшению размеров рубцовой ткани. Такой значительный регресс после моделирования инфаркта миокарда удалось показать, пожалуй, только в одной работе, проведенной на мышах, в результате применения G-CSF (Orlic D. et al., 2001).

Однако, следует заметить, что в статье А.А. Матюкова и соавт. морфометрические исследования проведены не совсем корректно. Известно, что вскоре после извлечения из грудной клетки миокард контрагирует (и это видно на рис. 5). Поэтому истинного отношения площади здорового миокарда к площади рубца (который сокращаться не может) получить такой методикой нельзя. Кроме того, авторы оценивали дилатацию миокарда также морфометрическим методом, который в данном случае не может полностью охарактеризовать функциональное состояние левого желудочка. Диастолический объем левого желудочка и соответственно его дилатация определяются многими факторами, например, растяжимостью миокарда, преднагрузкой, и, таким образом, является понятием функциональным. Для оценки таких параметров как фракция выброса, размеры камер сердца, давление в левом желудочке и других показателей функции миокарда традиционно применяют ультразвуковой метод или перфузию изолированных сердец по Langendorf или Neely.

Несмотря на небольшое несоответствие применяемых морфометрических методов задачам исследования, разница в двух экспериментальных группах видна невооруженным глазом. Таким образом, данная статья дарит новую пищу для размышлений клиницистам, которые уже несколько лет пытаются выяснить вопрос о приемлемости интрамиокардиальной трансплантации нефракционированных свежевыделенных клеток костного мозга.

References

Государственный доклад о состоянии здоровья населения Российской Федерации в 2001 году. Здравоохранение Российской Федерации. 2000; 2: 7-22.
Малайцев В.В., Богданова И.М., Сухих Г.Т. Современные представления о биологии стволовой клетки. Архив патологии. 2002; 4: 7-11.
Репин В.С., Сухих Г.Т. Медицинская клеточная биология. М. 1998.
Smits A.M., van Vliet P., Hassink R.J. et al. The role of stem cells in cardiac regeneration. J. Cell Mol. Med. 2005; 9(1): 25-36.
Itescu S., Schuster M.D., Kocher A.A. New directions in strategies using cell therapy for heart disease. J. Mol. Med. 2003; 81(5): 288-96.
Orlic D., Kajstura J., Chimenti S. et al. Bone marrow cells regenerate infarcted myocardium. Nature. 2001; 410: 701-5.
Tang Y.L., Zhao Q., Qin X. et al. Paracrine action enhances the effects of autologous mesenchymal stem cell transplantation on vascular regeneration in rat model of myocardial infarction. Ann. Thorac. Surg. 2005; 80(1): 229-36.
Vandervelde S., Luyn M.J., Tio R.A. et al. Signaling factors in stem cell-mediated repair of infarcted myocardium. Mol. Cell. Cardiol. 2005; 39(2): 36376.
Azarnoush K., Maurel A., Sebbah L. et al. Enhancement of the functional benefits of skeletal myoblast transplantation by means of coadministration of hypoxia-inducible factor 1alpha. J. Thorac. Cardiovasc. Surg. 2005; 130(1): 1739.
Archundia A., Aceves J.L., Lopez-Hernandez M. et al. Direct cardiac injection of G-CSF mobilized bone-marrow stem-cells improves ventricular function in old myocardial infarction. Life Sci. 2005; 78(3): 279-83.
Heissing B., Hattori K., Dias S. et al. Recruitment of stem cell and progenitor cells from bone marrow niche requirens MMP-9 release of kit-ligand. Cell 2002; 109: 625-37.
Matsumoto R., Omura T., Yoshiyama M. et al. Vascular endothelial growth factor-expressing mesenchymal stem cell transplantation for the treatment of acute myocardial infarction. Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol. 2005; 25(6): 1168-73.
Yoon J., Min B.G., Kim Y.H. Differentiation, engraftment and functional effects of pre-treated mesenchymal stem cells in a rat myocardial infarct model. Acta Cardiol. 2005; 60(3): 277-84.
Михайлов В.В. Основы патологической физиологии. М. 2001.
Shintani S., Murohara T., Ikeda H. et al. Augmentation of postnatal neovascularization with autologous bone marrow transplantation. Circ. 2001; 103: 897-5.
Frangogiannis N.G., Entman M.L. Chemokines in myocardial ischemia. Trends Cardiovasc. Med. 2005; 15(5): 163-9.
Dobaczewski M., Bujak M., Zymek P. et al. Extracellular matrix remodeling in canine and mouse myocardial infarcts. Cell Tissue Res. 2006; 324(3): 475-88.
Ren G., Dewald O., Frangogiannis N.G. Inflammatory mechanisms in myocardial infarction. Curr. Drug. Targets Inflamm. Allergy. 2003; 2(3): 24256.
Tang Y.L. Autologous mesenchymal stem cells for post-ischemic myocardial repair. Methods Mol. Med. 2005; 112: 183-92.
Tarakura N., Watanabe T., Suenobu S. et al. A Role for hematopoietic stem cells in promoting angiogenesis. Circ. 1999; 53(11): 452-68.