STUDY OF BIODISTRIBUTION OF LABELED MESENCHYMAL CELLS OF THE BONE MARROW STROMA IN LABORATORY ANIMALS

Abstract

Full Text

В настоящее время одним из перспективных направлений клеточной терапии является применение мезенхимальных стромальных клеток (МСК). Изучение биораспределения клеток после введения в организм - важный этап доклинических исследований биомедицинского клеточного препарата [1]. Цель работы - оценить распределение меченых МСК у лабораторных животных. В опытах использовали самцов лабораторных нелинейных мышей (n=20) в возрасте 6 мес. массой 19-21 г. Эксперименты проводили в соответствии с положениями «Европейской конвенции о защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и других научных целей» (Страсбург, 1986). МСК выделяли из костного мозга мышей (n=5) по общепринятой методике. С учетом иммунологических свойств мезенхимальных клеток, подбор совместимых пар «донор-реципиент» не осуществляли. Клетки культивировали в среде aMEM с добавлением эмбриональной телячьей сыворотки (20%) в условиях 5% CO2 и температуре 37 °С. Мечение МСК производили сукцинимидным эфиром дикарбо-скифлуоресцеина по протоколу производителя. Меченые клетки вводили в хвостовую вену в количестве 1х106 / кг. Мышей выводили из эксперимента через 1 (n=5), 24 (n=5) и 72 (n=5) ч после введения взвеси клеток, извлекали сердце, легкие, печень, селезенку, почки. Выполняли гистологическую проводку биологического материала по общепринятому способу и готовили парафиновые блоки. Изучение срезов тканей проводили с использованием люминесцентного микроскопа Axio Scope A1 (х100, длины волн возбуждения - 475 нм, эмиссии - 530 нм). Через 1 ч максимальное количество меченых МСК обнаруживали в легких (12-14 клеток в поле зрения, медиана Me=13), в меньшем числе - в почках (3-8 клеток в поле зрения, Me=4), в сердце (2-5, Мe=3), в селезенке (2-3, Me=2), в печени (1-2, Me=1). Через 24 ч наибольшая концентрация детектируемых элементов выявлена в почках (3-6 клеток в поле зрения, Me=4), в остальных исследованных органах - менее 2 клеток в поле зрения. К концу эксперимента (72 ч) количество флуоресцирующих МСК в тканях животных значительно снизилось и составляло не более 1 клетки в поле зрения. Наблюдаемая динамика содержания меченых элементов в органах согласуется с опубликованными данными [2]. Таким образом, изучено биораспределение меченых МСК после внутривенного введения лабораторным животным. Исследуемые клетки элиминируются из тканей в течение 3 суток.