Sozdanie protokola napravlennoy differentsirovki indutsirovannykh plyuripotentnykh stvolovykh kletok cheloveka v srednie shipikovye neyrony s vozmozhnost'yu prodolzhitel'nogo kul'tivirovaniya i transgeneza predshestvennikov dannykh kletok

Full Text

Средние шипиковые нейроны (СШН) представляют основную массу нейронов стриатума, гибель которых приводит к тяжёлому генетическому нейродегенеративному заболеванию - болезни Хантингтона. Гибель СШН является конечным результатом сложных процессов, вызванных генетической патологией в гене Huntingtin (HTT), а именно, аномальным увеличением (экспансией) тринуклеотидных повторов CAG. Направленная дифференцировка индуцированных плюрипотентных стволовых клеток (ИПСК) человека в узкоспециализированные типы нейронов даёт возможность изучать in vitro молекулярные механизмы развития нейродегенеративных заболеваний, а также использовать дифференцированные нейроны для тестирования различных химических соединений, являющихся потенциальными лекарственными препаратами. Для таких биомедицинских исследований необходим высокоэффективный, воспроизводимый, простой протокол дифференцировки, позволяющий нарастить в большом количестве узкоспециализированные типы нейральных клеток. Однако существующие протоколы направленной дифференцировки ИПСК в СШН являются долгими, трудоёмкими и дорогостоящими, что значительно затрудняет их использование. В данной работе мы разработали протокол дифференцировки ИПСК в ГАМКэргические СШН, позволяющий продолжительное время культивировать клетки в стадии предшественников СШН, что даёт возможность нарастить в большом количестве клетки, успешно переживающие криоконсервацию и значительно упрощающую использование данного протокола. Более того, нами впервые показано при помощи технологии редактирования генома с использованием CRISPR/Cas9, что предшественники СШН успешно поддаются трансгенезу, что открывает новые перспективы использования СШН с модифицированным геномом в биомедицинских работах.

About the authors

E. V Grigor'eva

Email: evlena@bionet.nsc.ru

T. B Malankhanova

A. Surumbaeva

S. V Pavlova

A. A Malakhova

S. M Zakiyan

References

Supplementary files