Morphofunctional properties of human adult adipose tissue multipotent mesenchymal stromal cells during culture in the presence of platelet lysate

Abstract

Full Text

Жировая ткань (ЖТ) является доступным источником мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток (ММСК) для регенеративной медицины. Перспектива использования ММСК ЖТ в клинической практике предполагает исключение из состава среды культивирования ксеногенных компонентов, таких как фетальная сыворотка крупного рогатого скота (ФС), что обусловливает необходимость поиска альтернативных компонентов, способных обеспечить оптимальный рост и дифференцировку клеток. Целью настоящей работы было оценить пролиферативные и дифференцировочные свойства, а также эффективность колониеобразования ММСК ЖТ человека при культивировании в присутствии аллогенного тромбоцитарного лизата (ТЛ). В работе использовали ММСК ЖТ человека 3-4-го пассажей. Для приготовления ТЛ цельную кровь взрослых доноров подвергали двукратному центрифугированию, после чего полученную и обогащенную тромбоцитами плазму замораживали для разрушения тромбоцитов и высвобождения тромбоцитарных факторов роста (PDGF). После размораживания полученный ТЛ центрифугировали, фильтровали и использовали в дальнейших исследованиях. ММСК ЖТ культивировали в присутствии 10% ТЛ или 10% ФС крупного рогатого скота. Метаболическую и пролиферативную активность ММСК ЖТ на разных этапах культивирования оценивали с использованием редокс-индикатора Alamar Blue, а также прямого подсчета клеток. Колониеобразующую активность ММСК ЖТ оценивали при культивировании клеток с низкой посевной плотностью в средах, содержащих 15% ФС или 10% ТЛ. Адипогенную и остеогенную дифференцировку проводили в течение 21 сут в средах, содержащих специфические индукторы. Эффективность остеогенной и адипогенной дифференцировки оценивали по экспрессии клетками щелочной фосфатазы или накоплению липидов, позитивно окрашивающихся Oil Red O. При культивировании ММСК ЖТ в присутствии ЭС в течение 7 сут. количество клеток в культурах увеличивалось в 1,5-2,2 раза. В присутствии ТЛ увеличение данного показателя было более выраженным (4,7-5,2 раза). При оценке эффективности колониеобразования ММСК ЖТ было установлено, что в присутствии 10% ТЛ количество образовавшихся колоний в 1,6 раз превосходило показатели, полученные с использованием ФС. Оценка диффе-ренцировочных свойств ММСК ЖТ после экспансии в средах, содержащих ЭС или ТЛ, показала различия в эффективности остеогенной дифференцировки клеток. Так, после культивирования ММСК ЖТ в присутствии ФС количество дифференцированных в остеогенном направлении клеток составляло 45-60%, а после экспансии в среде с ТЛ - более 85%. Вместе с тем, значимых отличий в эффективности адипогенной дифференцировки клеток в исследованных группах выявлено не было. Спонтанная дифференцировка в остеогенном и адипогенном направлениях также не отличалась между группами и составляла менее 4%. Полученные данные свидетельствуют о перспективности использования ТЛ в качестве альтернативы ксеногенной эмбриональной сыворотке для культивирования ММСК ЖТ человека. Данный подход культивирования представляется перспективным для тканевой инженерии и регенеративной медицины. искч 10L ИНСТИТУТ стволовых КЛЕТОК ЧЕЛОВЕКА www.hsci.ru V Гемабанк L J Банк стволовых клеток • Крупнейший банк персонального хранения стволовых клеток пуповинной крови в РФ и СНГ • Около 20 000 семей доверили Гемабанку хранение уникального биологического материала • Активное участие в исследованиях клеток пуповинной крови НЕОВАСКУЛГЕН* • Первый в Европе геннотерапевтический препарат, кодирующий синтез фактора роста эндотелия сосудов (Vascular Endothelial Growth Factor, VEGF165) для лечения хронической и критической ишемии нижних конечностей • «Первый в классе» препарат для терапевтического ангиогенеза. Локальное введение препарата способствует формированию новой сосудов в зоне ишемии • Новые сосуды-новые возможности Genetico Сет» ме&*чинМ1/л цеитрое • Общероссийская сеть медико-генетических центров нового образца • Широкие возможности диагностики и профилактики наследственных заболеваний • Активное применение принципов управления здоровьем; профилактический подход в медицинской генетике этноген • Генетический скрининг, который проводится на основе уникального ДНК-чипа «Этноген» • Одномоментное исследование на 66 наследственных моногеннных заболеваний и их носительство, а также выявление предрасположенности к развитию 6 многофакторных патологий • Направленность на генетическую специфику жителей России, высокая информативность V Репробанк’ L. J Банк репродуктивных тканей • Высокотехнологичный банк хранения репродуктивных клеток человека, включающий в себя современную лабораторию, донорский и персональный банкхранения • Расширенное генетическое тестирование доноров • Партнерство с одним из крупнейших мировых банков спермы California Cryobank (США) SPRS ТЕРАПИЯ • Уникальный персональный комплекс диагностических и лечебных процедур для восстановления кожи при ее естественных и приобретенных изменениях, основанный на применении собственных клеток кожи пациента - фибробластов • Первая и единственная клеточная технология, одобренная регуляторными органами РФ для персонализированного применения при коррекции возрастных изменений кожи • Инновационная технология защищена 4 патентами; опубликовано более 20 работ в российских и мировых журналах