Study of biological properties of stromal vascular fraction cells isolated from adipose tissue

Full Text

Клеточная терапия является перспективным методом лечения многих дегенеративных, травматических и воспалительных заболеваний ЦНС. В настоящее время хорошо изучены мультипотентные мезенхимальные стромальные клетки (ММСК), которые широко исследуются для решения различных клинических задач, в частности, в лечении дегенеративных заболеваний ЦНС. Известно, что клетки стромально-васкулярной фракции (СВФ), полученные из жировой ткани, содержат ММСК, обладают целым рядом недостаточно изученных биологических свойств. Поэтому целью исследования являлась оценка влияния клеток СВФ жировой ткани взрослых мышей и крыс на иммунные реакции, регенеративные процессы в коже и опухолегенез в головном мозге. Из жировой ткани мышей и крыс была получена СВФ клеток, согласно общепринятому протоколу. Изучена динамика адгезии к пластику выделенных клеток и сопоставлена их адгезивная и фагоцитарная активность. После культивирования клеток СВФ, выделенных из жировой ткани, на 8-10 сут. был получен монослой фибробластов и фибробластоподобных клеток, которые при добавлении ретиноевой кислоты дифференцировались в нервные клетки. Клетки СВФ были изучены в реакции смешанной культуры лимфоцитов (СКЛ), реакции хозяин против трансплантата (РХПТ), а также оценено их влияние на рост внутримозговой глиомы крыс (штамм 101.8) и регенерацию экспериментальной раны у крыс. Было установлено, что клетки, адгезированные к пластику, достоверно угнетали клеточный иммунный ответ в РХПТ и пролиферативный ответ периферических лимфоцитов в аутологичной, сингенной, аллогенной и ксеногенной системах. Супернатанты адгезированной фракции различных сроков культивирования обладали различными иммунологическими свойствами: 24-частовые супернанты подавляли пролиферативный ответ лимфоцитов в СКЛ и индуцированный митогеном пролиферативный ответ лимфоцитов, тогда, как супернатанты после 7-дневного культивирования стимулировали пролиферативный ответ в СКЛ. Супернатант клеток 72 ч. культивирования подавлял пролиферативный ответ аутогенных лимфоцитов, но усиливал индуцированный митогеном пролиферативный ответ аллогенных лимфоцитов мышей. Супернатант СВФ достоверно увеличивал показатели стимулируемого фагоцитоза. Экспериментами по моделированию раневого процесса было показано, что клетки и супернатант СВФ ранних пассажей усиливали воспаление, а поздних (7-14-суточные) стимулировали более быстрое заживление ран. Совместное введение клеток СВФ с опухолевыми клетками достоверно тормозило рост экспериментальной внутримозговой глиомы крыс штамм 101.8. Морфологическими и ультрамикроскопическими методами были выявлены очаги некроза и морфологические признаки апоптоза части опухолевых клеток в этих опухолях. Таким образом, клетки СВФ, содержащие ММСК, обладают широким спектром биологического действия, в том числе иммуномодулирующими свойствами. Это может быть связано с тем, что ММСК, находящиеся в составе СВФ, полученной из ЖТ, продуцируют обширный спектр как провоспалительных, так и антивоспалительных цитокинов и супрессорных факторов. В зависимости от исходного состояния мишеней и окружающих тканей, их антигенных и трансформирующих свойств, ММСК могут оказывать действие различной направленности. Известно также, что ММСК используют различные механизмы супрессии и активации. Так, в частности, многообразны механизмы иммуносупрессии - через индукцию Т-регуляторных клеток, продукцию ММСК TGFp, PgE2, ИДО и NO. Другой фактор, определяющий иммунорегуляторный эффект ММСК - растворимая форма HLAG5. Нейтрализация антителами HLAG5 подавляет генерацию CD4CD25FoxP3+-T клеток. Стимуляция регенеративных процессов ММСК и их предшественниками связывается также с синтезируемыми ими цитокинами, в том числе с гепато-протекторным фактором. Таким образом, комплексными иммунологическими, морфологическими и ультрамикроскопическими методами удалось выделить и изучить некоторые свойства клеток СВФ жировой ткани, а также отметить перспективность их изучения для решения задач регенераторной медицины.

About the authors

N. I Lisyany

I. A Gnedkova

L. N Belskay

A. I Kluchnikova

D. N Stanetskay

E. V Zadorozhnay

V. M Semenova

L. I Stayino

D. M Egorova

V. V Vaslovich

M. A Gnedkova

A. A Shmeleva

References

Supplementary files