Development of an experimental model of treatment of liver fibrosis with stromal-vascular fraction of adipose tissue

Abstract

Full Text

Фиброз печени - это патологический процесс, при котором в результате хронического воспаления происходит постепенное замещение клеток печени соединительной тканью. Основной причиной возникновения фиброза печени являются хронические вирусные гепатиты, а также чрезмерное употребление алкоголя. Эффективных методов лечения фиброза печени не существует. Это делает актуальным поиск новых методов, направленных на функциональное восстановление печени и ее регенерацию. Известно, что стромально-васкулярная фракция (СВФ) клеток жировой ткани способна запускать реорганизацию рубцовых поражений, индуцировать неоангиогенез и модулировать воспалительные и иммунные процессы. Целью данного исследования явилась разработка модели фиброза печени, позволяющей проводить изучение эффекта трансплантации клеток стромально-васкулярной фракции жировой ткани. Материал и методы. Для отработки модели лечения были использованы 5 самцов мышей, гибриды F1 C57/CBA, в возрасте 8 нед. с фиброзом, индуцированным при помощи четыреххлористого углерода. Жировую ткань получали под общим наркозом путем шприцевой липосакции паховой и брюшной области. Липоаспират промывали PBS (Biowest, США), дезагрегировали путем инкубации в 0,15% коллагеназе II типа (Sigma, США) при 37°С в течение 30 мин. После чего производился подсчет клеток. Аликвоту каждого образца СВФ в количестве 3х105 клеток на см2 помещали в среду (DMEM/ F12 (StemCell Technology, США) с добавлением FBS (Biological Industries, Израиль) до 10%, 2 мМ L-глутамина (StemCell Technology, США), 100 ед/мл пенициллина и 100 мг/мл стрептомицина (StemCell Technology, США) для дальнейшей экспансии мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток. Смену среды проводили каждые 3-4 сут. Результаты. Всем животным была выполнена липосакция в объеме 2 мл. Содержание выделенных СВФ варьировало от 4 до 12 млн клеток. Клетки СВФ вводились в количестве 400 тыс. в 0,5 мл физиологического раствора внутривенно и внутрибрюшинно сразу после выделения. Осложнений, связанных с забором жировой ткани или введением СВФ, отмечено не было. В результате трехнедельной экспансии было получено в среднем по 1,5 млн ММСК. Для подтверждения мультипотентности была проведена дифференцировка выращенных клеток в трех ортодоксальных направлениях (кость, жир, хрящ) по стандартным методикам. Выводы. Впервые показана принципиальная техническая возможность выполнения шприцевой липосакции мышам с последующим выделением из липоаспиратов СВФ. Полученная СВФ пригодна для аутогенного использования. Полученные данные были положены в основу протокола экспериментального исследования по лечению фиброза печени с помощью клеток СВФ.