Пролиферация и дифференцировка предшественниковмиелоидного ростка кроветворения пуповинной кровичеловека при экспансии in vitro

Обложка


Цитировать

Полный текст

Открытый доступ Открытый доступ
Доступ закрыт Доступ предоставлен
Доступ закрыт Доступ платный или только для подписчиков

Аннотация

Исследованы закономерности пролиферации и диффе-
ренцировки в миелоидном направлении CD34+-популяции
клеток пуповинной крови человека при экспансии in vitro
над монослоем мультипотентных мезенхимных стромаль-
ных клеток костного мозга (ММСК КМ) и без него в бес-
сывороточной среде под воздействием рекомбинантных
факторов IL-3, IL-6, SCF и Flt3/l.
Из пуповинной крови здоровых рожениц (n = 4) выде-
ляли фракцию мононуклеарных клеток (MK), часть кото-
рой обогащали CD34+ клетками, методом положительной
иммуномагнитной сепарации (CD34об). Экспансию in vitro
обеих фракций проводили в течение 2 нед. По мере роста
клетки рассевали на новые площади. Экспрессию CD34 и
CD45 определяли методом проточной цитофлуориметрии,
субпопуляции миелоидных предшественников - колониео-
бразующим тестом.
За две недели культивирования количество CD34+ кле-
ток фракции МК увеличилось в 70±29 раз без подложки
и в 980±414 раз на подложке. Прирост CD34+ клеток в
СD34об фракции достоверно не отличался от такового в
МК. В течение первой недели экспансии субпопуляцион-
ный состав предшественников не менялся, на второй не-
деле - гранулоцитопоэз превалировал над эритропоэзом.
Мониторинг экспрессии CD34 и CD45 показал существова-
ние двух популяций кроветворных клеток, одна из которых
теряет CD34 на первой неделе экспансии, другая - только
на второй. Подложка ММСК КМ способствует достоверно
большему (р < 0,05) увеличению количества CD34+ кле-
ток и колониеобразующих единиц в сравнении с вариан-
тами культивирования без подложки и вызывает их пере-
распределение между суспензионной и адгезированной
фракциями клеток. С ММСК связываются преимуществен-
но либо эритроидные, либо мультипотентные предшествен-
ники. Для экспансии мультипотентных предшественников
миелоидного ряда оптимальным является культивирование
CD34об фракции клеток на подложке ММСК КМ в период
до одной недели со средней кратностью увеличения ядро-
содержащих клеток - 56±32 раз, CD34+ клеток - 36±15
раз, мультипотентных предшественников - 45±18 раз,
всех КОЕ - 60±11 раз.

Об авторах

Н В Петёвка

ГУ «Республиканский научно-практический центр гематологии и трансфузиологии»Министерства здравоохранения Республики Беларусь, Минск, Беларусь

ГУ «Республиканский научно-практический центр гематологии и трансфузиологии»Министерства здравоохранения Республики Беларусь, Минск, Беларусь

Н В Гончарова

ГУ «Республиканский научно-практический центр гематологии и трансфузиологии»Министерства здравоохранения Республики Беларусь, Минск, Беларусь

ГУ «Республиканский научно-практический центр гематологии и трансфузиологии»Министерства здравоохранения Республики Беларусь, Минск, Беларусь

И Н Северин

ГУ «Республиканский научно-практический центр гематологии и трансфузиологии»Министерства здравоохранения Республики Беларусь, Минск, Беларусь

ГУ «Республиканский научно-практический центр гематологии и трансфузиологии»Министерства здравоохранения Республики Беларусь, Минск, Беларусь

С М Космачева

ГУ «Республиканский научно-практический центр гематологии и трансфузиологии»Министерства здравоохранения Республики Беларусь, Минск, Беларусь

ГУ «Республиканский научно-практический центр гематологии и трансфузиологии»Министерства здравоохранения Республики Беларусь, Минск, Беларусь

М П Потапнёв

ГУ «Республиканский научно-практический центр гематологии и трансфузиологии»Министерства здравоохранения Республики Беларусь, Минск, Беларусь

ГУ «Республиканский научно-практический центр гематологии и трансфузиологии»Министерства здравоохранения Республики Беларусь, Минск, Беларусь

Список литературы

  1. Broxmeyer H.E. Cord blood: biology, immunology, banking, and clinical transplantation. Bethesda (Maryland): AABB Press; 2004.
  2. Hogge D.E., Lambie K., Sutherland H.J. et al. Quantitation of primitive and lineage-committed progenitors in mobilized peripheral blood for prediction of platelet recovery post autologous transplant. Bone Marrow Transplant 2000; 25: 589-98.
  3. Zubair A., Zahrieh D., Daley H. et al. Early neutrophil engraftment following autologous BMT provides a functional predictor of long-term hematopoietic reconstitution. Transfusion 2003; 43: 614-21.
  4. Arber C., Halter J., Stern M. et al. Graft source determines human hematopoietic progenitor distribution pattern within the CD34(+) compartment. Bone Marrow Transplant 2011; 46(5): 650-8.
  5. Bittencourt H., Rocha V., Chevret S. et al. Association of CD34 cell dose with hematopoietic recovery, infections, and other outcomes after HLA-identical sibling bone marrow transplantation. Blood 2002; 99: 2726-33.
  6. Faucher C., Le Corroller A.G., Chabannon C. et al. Autologous transplantation of blood stem cells mobilized with filgrastim alone in 93 patients with malignancies: the number of CD34+ cells reinfused is the only factor predicting both granulocyte and platelet recovery. J Hematother. 1996; 5:663-70.
  7. Majeti R., Park C.Y., Weissman I.L. Identification of a hierarchy of multipotent hematopoietic progenitors in human cord blood. Cell Stem Cell 2007; 1(6): 635-45.
  8. Osawa M., Hanada K., Hamada H. et al. Long-term lymphohematopoietic reconstitution by a single CD34-low/negative hematopoietic stem cell. Science 1996; 273: 242-5.
  9. Wagner J.E., Barker J.N., DeFor T.E. et al. Transplantation of unrelated donor umbilical cord blood in 102 patients with malignant and non malignant diseases: influence of CD34 cell dose and HLA disparity on treatment-related mortality and survival. Blood 2002; 100: 1611-8.
  10. Hofmeister C.C., Zhang J., Knight K.L. et al. Ex vivo expansion of umbilical cord blood stem cells for transplantation: growing knowledge from the hematopoietic niche. Bone Marrow Transplantation 2007; 39: 11-23.
  11. Calvi L.M., Adams G.B., Weibrecht K.W. et al. Osteoblastic cells regulate the haematopoietic stem cell niche. Nature 2003; 425 (6960): 778-9.
  12. Zhang J., Niu C., Ye L. et al. Identification of the haematopoietic stem cell niche and control of the niche size. Nature 2003; 425(6960): 836-41.
  13. Majumdar M.K., Thiede M.A., Haynesworth S.E. et al. Human marrow derived mesenchymal stem cells (MSCs) express hematopoietic cytokines and support long-term hematopoiesis when differentiated toward stromal and osteogenic lineages. J Hematother Stem Cell Res. 2000; 9(6): 841-8.
  14. Breems D.A., Blokland E.A., Siebel K.E. et al. Stroma-contact prevents loss of hematopoietic stem cell quality during ex vivo expansion of CD34+ mobilized peripheral blood stem cells. Blood 1998; 91(1):111-7.
  15. Kosmacheva S., Seviaryn I., Goncharova N. et al. Hepatogenic potential of human bone marrow and umbilical cord blood mesenchymal stem cells. Bull. Exp. Biol. Med. 2011; 151: 142-9.
  16. Mayani H., Little M-T., Dragowska W. et al. Differential effects of the hematopoietic inhibitors MIP-1ƒ, TGF-ƒ, and TNF-ƒ on cytocine-induced proliferation of subpopulations of CD34+ cells purified from cord blood and fetal liver. Exp. Hematol. 1995; 23: 422-7.
  17. Mayani H., Dragowska W., Lansdorp P.M. Characterization of functionally distinct subpopulations of CD34+ cord blood cells in serum-free long-term cultures supplemented with hematopoietic cytokines. Blood 1993; 82: 2664-72.
  18. Douay L. Culture conditions for ex vivo expansion of hematopoietic ptimitive cells. http://mmserver.cjp.com/gems/blood/ ABMT.10.Douay.pdf
  19. Poloni A., Giarratana M.C., Firat H. et al. The ex vivo expansion capacity of normal human bone marrow cells is dependent on experimental conditions: role of the cell concentration, serum and CD34+ cell selection in stroma-free cultures. Hematol. Cell Ther. 1997; 39(2): 49-58.
  20. Andrade-Zaldivar H., Santos L., Rodriguez A. Expansion of human hematopoietic stem cells for transplantation: trends and perspectives. Cytotechnology 2008; 56: 151-60.
  21. Lu L., Xiao M., Shen R.N. et al. Enrichment, characterization and responsiveness of single primitive CD34+++ human cord blood hematopoietic progenitor cells with high proliferative and replating potential. Blood 1993; 81: 41-8.
  22. Mayani H., Gutierres-Rodriguez M., Espinoza L. et al. Kinetics of hematopoiesis in Dexter-type long-term cultures established from human umbilical cord blood cells. Stem Cells 1998; 16: 127-35.
  23. Ma D.D., Varga D.E., Biggs J.C. Donor marrow progenitors (CFU-Mix, BFU-E and CFU-GM) and haemopoietic engraftment following HLA matched sibling bone marrow transplantation. Leuk Res. 1987; 11(2): 141-7.
  24. Frassoni F., Gualandi F., Podestà M. et al. Direct intrabone transplant of unrelated cord-blood cells in acute leukaemia: a phase I/ II study. Lancet Oncol. 2008; 9(9): 831-9.

Дополнительные файлы

Доп. файлы
Действие
1. JATS XML
Скачать

© Эко-Вектор, 2012


СМИ зарегистрировано Федеральной службой по надзору в сфере связи, информационных технологий и массовых коммуникаций (Роскомнадзор).
Регистрационный номер и дата принятия решения о регистрации СМИ: 

Данный сайт использует cookie-файлы

Продолжая использовать наш сайт, вы даете согласие на обработку файлов cookie, которые обеспечивают правильную работу сайта.

О куки-файлах