ОПТИМИЗАЦИЯ УСЛОВИЙ ПОЛУЧЕНИЯ И ВЕДЕНИЯ КУЛЬТУР ФИБРОБЛАСТОВ КОЖИ И ДЕСНЫ ЧЕЛОВЕКА

Обложка


Цитировать

Полный текст

Открытый доступ Открытый доступ
Доступ закрыт Доступ предоставлен
Доступ закрыт Доступ платный или только для подписчиков

Аннотация

Для определения оптимальных условий получения культуры фибробластов из биопсийных образцов кожи и десны человека проведена сравнительная оценка 11 сывороток эмбрионов (плодов) крупного рогатого скота различных производителей, аутосыворотки человека, а также 3 бес-сывороточных (serum-free media, SFM) и 4 низко-сывороточных (serum-reduced media, SRM) образцов среды. Критерием оценки на этапе получения первичной культуры служила эффективность колониеобразования (ЭКО), а на последующих пассажах - время удвоения (T 1/2) клеточной популяции фибробластов. Результаты показали, что в зависимости от используемой сыворотки и питательной среды способность фибро-бластов кожи (Фк) формировать колонии может меняться в 4 и более раз, а фибробластов десны (Фд) в 1,5-1,8 раза. Проведенный клональный анализ показал, что фи-бробласты в культуре формируют три типа колоний, отличающихся по количеству и морфологии клеток. Соотношение типов колоний меняется в зависимости от используемой среды. При культивировании клеток установлено, что при использовании одной и той же среды (DMEM) добавление разных сывороток обеспечивает различное время удвоения клеточных популяций Фк и Фд. В целом, успех получения первичной культуры фибро-бластов обусловливается, в первую очередь, выбором питательной среды и сыворотки, обеспечивающими формирование крупных клеточных колоний, представленных фракцией быстро пролиферирующих клеток. При дальнейшей экспансии культуры главным становится использование сред, обеспечивающих высокую скорость роста клеточной популяции.

Об авторах

В. Л Зорин

Институт стволовых клеток человека, Москва, Россия; ФГБУ ГНЦ ФМБЦ им. А.И. Бурназяна ФМБА России, Москва, Россия

П. Б Копнин

Институт стволовых клеток человека, Москва, Россия; НИИ Канцерогенеза РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН, Москва, Россия

А. И Зорина

Институт стволовых клеток человека, Москва, Россия

И. И Еремин

Институт стволовых клеток человека, Москва, Россия; ФГБУ ГНЦ ФМБЦ им. А.И. Бурназяна ФМБА России, Москва, Россия

Н. Л Лазарева

ФГБУ ГНЦ ФМБЦ им. А.И. Бурназяна ФМБА России, Москва, Россия

Т. С Чаузова

ФГБУ ГНЦ ФМБЦ им. А.И. Бурназяна ФМБА России, Москва, Россия

Д. П Самчук

ФГБУ ГНЦ ФМБЦ им. А.И. Бурназяна ФМБА России, Москва, Россия

А. П Петрикина

ФГБУ ГНЦ ФМБЦ им. А.И. Бурназяна ФМБА России, Москва, Россия

П. С Еремин

ФГБУ ГНЦ ФМБЦ им. А.И. Бурназяна ФМБА России, Москва, Россия

И. Н Корсаков

ФГБУ ГНЦ ФМБЦ им. А.И. Бурназяна ФМБА России, Москва, Россия

О. С Гоинаковская

ФГБУ ГНЦ ФМБЦ им. А.И. Бурназяна ФМБА России, Москва, Россия

Е. В Соловьева

Институт стволовых клеток человека, Москва, Россия

К. В Котенко

ФГБУ ГНЦ ФМБЦ им. А.И. Бурназяна ФМБА России, Москва, Россия

А. А Пулин

ФГБУ ГНЦ ФМБЦ им. А.И. Бурназяна ФМБА России, Москва, Россия

Список литературы

  1. Franquesa M., Hoogduijn M.J., Engela A.U. et al. Mesenchymal stem cells in solid organ transplantation tMISOT) fourth meeting: lessons learned from first clinical trials. Transplantation. 2013; 96(3): 234-8.
  2. Котенко К.В., Еремин И.И., Пулин А.А. и др. Применение клеточных технологий в спортивной медицине. Часть 1: мышечные травмы [обзор литературы). Спортивная медицина: наука и практика 2013; 4: 14-21.
  3. Зорина А.И., Зорин В.Л., Черкасов В.Р. и др. Метод коррекции возрастных изменений кожи с применением аутологичных дер-мальных фибробластов. Клиническая дерматология и венерология 2013; 3: 30-7.
  4. Sellheyer K., Krahl D. Skin mesenchymal stem cells: prospects for clinical dermatology. J. Am. Acad. Dermatol. 2010; 63 (5):859-65.
  5. Bianco P., Cao X., Frenette P.S. et al. The meaning, the sense and the significance: translating the science of mesenchymal stem cells into medicine. Nat. Med. 2013; 19 (1): 35-42.
  6. Котенко К.В., Еремин И.И., Мороз Б.Б. и др. Клеточные технологии в лечении радиационных ожогов: опыт ФМБЦ им. А.И. Бур-назяна. Клеточная трансплантология и тканевая инженерия 2012; 7 (2): 97-102.
  7. Зорин В.Л., Копнин П.Б., Комлев В.С. и др. Изучение возможности применения мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток, выделенных из десны человека, в составе тканеинженерного конструкта для восстановления костных тканей пародонта. Клеточная трансплантология и тканевая инженерия 2013; 8 (3): 28-9.
  8. Грудянов А.И., Степанова И.И., Зорин В. Л. и др. Применение аутогенных фибробластов слизистой оболочки полости рта человека для устранения рецессий десны. Стоматология 2013; 1: 21-5.
  9. Zorin V.L., Komlev V.S., Zorina A.I. et al. Octacalcium phosphate ceramics combined with gingiva-derived stromal cells for engineered functional bone grafts. Biomed. Mater. 2014; 9 (5): 055005.
  10. Mostafa N.Z., Uluda H., Varkey M. et al. In Vitro Osteogenic Induction Of Human Gingival Fibroblasts For Bone Regeneration. The Open Dent. J. 2011; (5): 139-145.
  11. Колокольцова Т.Д., Юрченко Н.Д., Нечаева Е.А. и др. Получение аттестованных фибробластов человека, пригодных для научных и медицинских исследований. Биотехнология 2007; (1): 58-64.
  12. Yamada K., Yamaura J., Katoh M. et al. Fabrication of cultured oral gingiva by tissue engineering techniques without materials of animal origin. J. Periodontol. 2006; 77(4): 672-7.
  13. Грудянов А.И., Зорин В.Л., Переверзев Р.В., Зорина А.И. Использование аутофибробластов при хирургическом лечении пародонтита. Стоматология 2013; 92 (5): 19-21.
  14. Зорин В.Л., Зорина А.И., Еремин И.И. и др. Сравнительный анализ остеогенного потенциала мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток слизистой оболочки полости рта и костного мозга. Гены и клетки 2014; 9 (1): 50-7.
  15. Alt E., Yan Y., Gehmert S. et al. Fibroblasts share mesenchymal phenotypes with stem cells, but lack their differentiation and colony-forming potential. Biol. Cell 2011; 103 (4): 197-208.
  16. Kuznetsov S., Mankani M., Bianco P., Robey P. Enumeration of the colony-forming units-fibroblast from mouse and human bone marrow in normal and pathological conditions. Stem Cell Research 2009; 2: 83-94.
  17. Aldahmash A., Haack-S0rensen M., Al-Nbaheen M. et al. Human serum is as efficient as fetal bovine serum in supporting proliferation and differentiation of human multipotent stromal (mesenchymal) stem cells in vitro and in vivo. Stem Cell Rev. 2011; 7(4): 860-8.
  18. Ng W., Ikeda S. Standardized, defined serum-free culture of a human skin equivalent on fibroblast-populated collagen scaffold. Acta Derm. Venereol. 2011; 91 (4): 387-91.
  19. Mazlyzam A.L., Aminuddin B.S., Saim L., Ruszymah B.H. Human serum is an advantageous supplement for human dermal fibroblast expansion: clinical implications for tissue engineering of skin. Arch. Med. Res. 2008; 39 (8): 743-52.
  20. Sun X., Gan Y., Tang T. et al. In vitro proliferation and differentiation of human mesenchymal stem cells cultured in autologous plasma derived from bone marrow. Tissue Eng. Part A 2008; 14 (3): 391-400.
  21. Сергеева Н.С. Шанский Я.Д., Свиридова И.К. и др. Биологические эффекты тромбоцитарного лизата при добавлении в среду культивирования клеток человека. Гены и клетки 2014; 9 (1): 77-85.
  22. Зорина А.И., Зорин В.Л., Черкасов В.Р. Prp в эстетической медицине. Экспериментальная и клиническая дерматокосметология 2013; (6): 10-22.

Дополнительные файлы

Доп. файлы
Действие
1. JATS XML
Скачать

© Эко-Вектор, 2014


СМИ зарегистрировано Федеральной службой по надзору в сфере связи, информационных технологий и массовых коммуникаций (Роскомнадзор).
Регистрационный номер и дата принятия решения о регистрации СМИ: 

Данный сайт использует cookie-файлы

Продолжая использовать наш сайт, вы даете согласие на обработку файлов cookie, которые обеспечивают правильную работу сайта.

О куки-файлах