Effect of hypotonic stress on recombinant lentiviral transduction in vitro

Процесс проникновения ретровирусов в клетку-хозяина происходит по одному из двух механизмов: рН-зависимое проникновение в клетку при помощи клатрин-опосредованного эндоцитоза или рН-незави-симое проникновение в клетку посредством прямого взаимодействия со специфическими рецепторами на поверхности клетки с последующим слиянием мембран. Известно, что гипотоническая среда приводит к значительной активации процессов эндоцитоза. В 2009 г. Yu-Hsiang Lee и Ching-An Peng показали, что гипотоническая среда значительно повышала инфек-ционность MoMuLV-GFP ретровируса [экотропный вирус, содержащий геном вируса лейкемии мышей
Молони, экспрессирующий белок GFP; Ecotropic Moloney murine leukemia virus]. Лентивирусы, в частности ВИЧ-1 , также принадлежат к семейству Retroviridae. Представители этого рода используют связывание поверхностных гликопротеинов с рецепторами на мембране клетки, что, в свою очередь, запускает каскад механизмов, способствующих последующему слиянию внешней оболочки вируса и клеточной мембраны с высвобождением вирусного капсида в цитоплазму.
Лентивирусы - один из наиболее эффективных векторов доставки рекомбинантных генов в клетки мишени. Лентивирусы способны инфицировать как делящиеся, так и неделящиеся клетки с высокой эффективностью, а современные способы получения рекомбинантных вирусов позволяют работать с ними в стандартных лабораториях 2 уровня биологической опасности. Интеграция провируса, содержащего реком-бинантные гены, в геном клетки-хозяина приводит к перманентной генетической модификации клеток и долговременной экспрессии трансгенов. Одним из применений рекомбинантных векторов на основе ленти-вирусов служит генетическая модификация клеток in vitro для последующего использования в генно-кле-точных приложениях. В связи с этим встаёт вопрос о повышении эффективности вирусной трансдукции in vitro.
Цель работы: исследование влияния гипотонической обработки клеток на эффективность инфицирования рекомбинантным лентивирусом.