Otsenka tsitotoksichnosti predimplantatsionnoy obrabotki bioprotezov dii pentaepoksidami

Abstract

Full Text

Глютаровый альдегид является основным сшивающим агентом для биопротезов в кардологии. Однако, он имеет ряд недостатков, таких как высокая токсичность и высокий риск кальцификации с последующей дисфункцией протеза. В качестве альтернативного метода сшивки были предложены эпоксидные соединения. Обработка ими улучшает физико-механические и тромборезистентные характеристики. Цель исследования: оценкатоксического действия биопротезов, пре-добработанных ди- и пентаэпоксидами, на мононукле-арные и эндотелиальные клетки. Материалы и методы. Объектом исследования являлись образцы бычьего (БП) и свиного (СП) перикарда с различными консервантами: глютаровый альдегид (ГА); диглицидиловый эфир этиленгликоля (ДЭ); 5% ДЭ (экспозиция 10 дней), затем 2% 1,2,3,4,6-пента-0-{ 1-[2-(глицидилокси) этокси]этил}- D-глюкопиранозы (экспозиция 10 дней) (10+10). Для получения экстрактов образцы биоматериала культивировали в полной ростовой среде 72 ч при 37 0С в соотношении 0,2 г ткани/ мл среды. Мононуклеарные клетки периферической крови здоровых доноров (МНК) выделяли на градиенте плотности фиколл/ верографина (р=1.078 г/л). МНК 25х104/лун культивировали в стандартных условиях 24 ч, затем производили замену среды на 100 мкл экстракта. Токсичность оценивали в МТТ-тесте через 72 ч. На монослой EaHy 926 укладывали образцы перикарда размером 1 x1 см. Через 48 ч инкубации конфлюэнтный слой оценивали на микроскопе Axio 0bserver (Zeiss, Германия). Результаты исследования статистически обрабатывали с использованием программы Statistica 10,0 for Windows (StatSoft, США). Жизнеспособность МНК через 24 ч культивирования с экстрактами всех образцов перикарда оставалась высокой. Через 72 ч наиболее выраженный токсический эффект выявлен в группе БП-ГА (жизнеспособность 69%, р<0,01), а наименее- в группе БП-10+10 (жизнеспособность 81%). Для свиного перикарда разницы в жизнеспособности МНК для различных консервантов через 24 и 72 ч не было выявлено. Следует отметить, что жизнеспособность МНК в группе СП-ГА была статистически выше через 72 ч в сравнении с группой БП-ГА (р=0,0001). При культивировании перикарда на монослое EaHy 926 через 48 ч выявлена зона гибели клеток вокруг образца БП-ГА. Для остальных образцов перикарда не выявлены повреждения монослоя EaHy 926. Таким образом, предложенный способ обработки биологических протезов ди- и пентаэпоксидами не является токсичным для МНК и эндотелиальных клеток.