Otsenka morfologicheskogo sostoyaniya mul'tipotentnykh mezenkhimnykh stromal'nykh kletok pri kul'tivirovanii v prisutstvii trekhmernykh matriksov, imitiruyushchikh mineral'noe veshchestvo regeneriruyushchey kostnoy tkani



Cite item

Full Text

Abstract

Full Text

Исследование клеток позволяет оценить особенности клеточного поведения и функциональный потенциал в различных условиях культивирования in vitro. Целью исследования явилась оценка морфологических особенностей мультипотентных мезенхимных стромальных клеток (ММСК) при культивировании в присутствии 3D-матриксов, имитирующих регенерирующую костную ткань. Нами была разработана модель трехмерного (3D) культивирования клеток с использованием подложек (10x10x1 мм3) из коммерчески чистого титана с шероховатым (Ra=2-5 мкм) кальцийфосфатным (КФ) покрытием. Клеточная линия ММСК жировой ткани (ММСК-ЖТ) была получена из липоаспирата человека. До начала культивирования число клеток, экспрессирующих молекулы CD105, CD73 и CD90 составляло не менее 95%; клеток, несущих маркеры CD45, CD34, CD20 и CD14 - не более 2%. Клетки инкубировали в стандартной культуральной среде DMEM/f12 (Gibco Life Technologies, СшА) без остеогенных добавок при 37оС, 1 00% влажности в атмосфере 5% С02. Иммунофенотипирование ММСК-ЖТ проводили на проточном цитометре MACS Quant (Miltenyi Biotec, Германия). Морфологическая оценка клеток выполнена при помощи конфокального микроскопа ZEISS LSM 700 с использованием специфичных красителей: DAPI (для окрашивания ядер), MitoTracker Green FM (для окрашивания митохондрий), Cell Plasma Membrane Staining Kit - 0range Fluorescence - Cytopainter (для окрашивания цитоплазмы). Съемку производили в течение 7 дней 1 раз в сутки с использованием объектива EC Plan-Neofluar 10x/0.3 DIC I. Определение фенотипического профиля культуры клеток после 14 дней культивирования позволило выявить увеличение числа клеток (p<0,05) с гемопоэтическим фенотипом CD45CD34CD14CD20+ при сокультивиро-вании ММСК с 3D-матриксом. Число клеток, несущих молекулы CD73+, CD90+, CD105+ оставалось на уровне значений, полученных при оценке 2D-культур (контроль). В контрольных группах площадь клеточных органелл (ядер и митохондрий) оказалась больше по сравнению с экспериментальными 3D-культурами. Это может свидетельствовать о высокой функциональной активности клеток контрольной группы. Площадь цитоплазмы в клетках вокруг 3D-матриксов была меньше таковой в контроле, что может свидетельствовать об уменьшении распластывания ММСК. Морфологические изменения ядра и цитоплазмы ММСК в 3D-культурах косвенно свидетельствуют в пользу изменения фибробластоподобной формы клеток в более объемные активные остеобласты.
×

References

Supplementary files

Supplementary Files
Action
1. JATS XML
Download

Copyright (c) 2019 Eco-Vector


СМИ зарегистрировано Федеральной службой по надзору в сфере связи, информационных технологий и массовых коммуникаций (Роскомнадзор).
Регистрационный номер и дата принятия решения о регистрации СМИ: