Sozdanie shtamma krysinykh kletok, ekspressiruyushchikh CD105 cheloveka

Abstract

Full Text

Эндоглин (CD105) - гликопротеин, высоко экспрессированный на активированном эндотелии. Его рассматривают как мишень для выявления ангиогенеза в опухолях. Целью работы было создание клеточной модели, предназначенной для испытания на животных препаратов антител, направленных против эндоглина человека. Методом ретровирусной трансдукции создали клетки крысиной глиомы С6, экспрессирующие CD1 05 человека. Для селекции клеток использовали пуромицин. Эффективность получения постоянной линии, обозначенной C6-hL-Eng, оценивали методом проточной цитоф-луориметрии, с помощью созданных в лаборатории меченых флуоресцеином антител против CD105 человека. Наибольшая эффективность трансдукции достигалась при добавлении к вирусным частицам полибрена в концентрации 8 мкг/мл. Режим нарастания концентрации пуромицина от 1,5 до 10 мкг/мл при селекции не сказывался на результате получения клеток C6-hL-Eng. Через 52 дня селекции отобрали одну из культур, содержавшую 99,5% CD105+ клеток, которые по критерию интенсивности флуоресценции представляли единую популяцию. Одну часть этих клеток в течение следующих 2 месяцев продолжали культивировать в присутствии пу-ромицина, а вторую культивировали без него. При выращивании клеток на антибиотике сохранялись исходные характеристики штамма. В культурах без пуромицина к концу срока количество CD105+ клеток осталось неизменным, однако появилась минорная популяция клеток с низкой экспрессией эндоглина. Для оценки туморогенности клетки C6-hL-Eng культивировали 3 суток без пуромицина и затем в дозе 6 млн. прививали подкожно белым аутбредным крысам. Контролем служили клетки глиомы С6. Через 7 суток в местах инъекции клеток вырастали опухоли. Экспрессию CD1 05 на опухолях, образованных из клеток C6-hL-Eng, подтверждали иммуногистохимически. Рост опухоли из клеток C6-hL-Eng сопровождался появлением в крови крыс растворимого эндоглина человека, который выявляли с помощью ИФА. Таким образом, создана биологическая модель, которая представляет постоянную линию клеток глиомы крыс, экспрессирующую эндоглин человека и при прививке животным образующую CD105+ опухоли. Эта модель позволяет проводить испытания препаратов антител, направленных против эндоглина человека.