Poisk novykh izoform glial'nogo neyrotroficheskogo faktora (GDNF), obladayushchikh neyronal'nymi induktornymi svoystvami

Abstract

Full Text

Целью данного исследования является поиск новых изоформ глиального нейротрофического фактора, обладающих нейрональными индукторными свойствами. Методы. Исследование проводилось на культурах клеток РС12, цельных и диссоциированных эмбриональных нейросферах мыши. Культуры клеток культивировали в присутствии ранее неизвестных изоформ глиального нейротрофического фактора (GDNF), названных 47, 62 и 63. В качестве контроля использовали среду, не содержащую исследуемые изоформы mGDNF. Нейроиндукторные свойства изоформ mGDNF оценивали методом иммуноцитохимического окрашивания клеток на р3-тубулин и подсчета длины р3-тубулин позитивных нейральных отростков, сформировавшихся после 6 дней культивирования модельных клеточных систем в присутствии исследуемых изоформ mGDNF. Результаты. Обнаружено, что одна из исследуемых форм mGDNF, обозначенная 47, обладает нейроиндук-торными свойствами и стимулирует образование р3-тубулин позитивных отростков в клетках, выбранных моделями in vitro. Эффективность образования отростков при использовании кондиционной среды, содержащей 47 форму, достоверно превышала результат в контроле в два раза на уровне статистической значимости 5%. Кондиционные среды, содержащие изоформы 62 и 63, не отличались по своей эффективности от контроля. Заключение. При анализе клеточных культур эукариот, экспрессирующих GDNF, постоянно обнаруживаются бенды с подвижностью отличной от ожидаемой расчетной. Можно предположить, что подобная картина с множественными бендами наблюдается и in vivo, а малые изоформы белка GDNF обладают нейроиндук-торными свойствами, стимулируют нейральную диф-ференцировку стволовых и (или) прогениторных клеток и способны проникать через гематоэнцефалический барьер. Результаты исследования обнаруженных изоформ на клеточных моделях in vitro показали, что из трех пептидов, 47 обладала заметными нейротрофическими свойствами и стимулировала формирование нейральных отростков. Эти результаты говорят о необходимости проведения дальнейших исследований. Таким образом, настоящая работа ориентирована на рассмотрение возможности применения пептидов, с аминокислотной последовательностью отличной от конвенциональной формы GDNF, в качестве альтернативы. На данном этапе исследования есть возможность надеяться на перспективность подхода, связанного с получением новых изоформ глиального нейротрофическо-го фактора, сохраняющих функциональную активность нативного GDNF с целью решения проблемы доставки GDNF в головной мозг.