Trekhmernye kletochnye modeli: otsenka migratsii kletok na plastikovoy, kollagenovoy i matriksnoy podlozhkakh

Abstract

Full Text

Двумерные (2D) клеточные модели - это простой, быстрый и экономически эффективный метод исследования клеточных реакций на лекарственные соединения и/или внешние раздражители, однако все чаще обсуждаются его ограничения. [1-2] Клетки в среде 3D-культуры морфологически и физиологически отличаются от клеток в среде 2D-культуры и по поведению больше похожи на клетки in vivo [3]. При очевидном преимуществе 3D моделей до сих пор нет четких критериев оценки эффективности функционирования клеток в 3D условиях, позволяющих проводить скрининг 3D культур. Одна из характеристик опухолевых клеток - это миграция или инвазивный рост. Очевидно, что для клеток данные показатели будут варьироваться в зависимости от выбранных подложек, изучение чего и было целью данной работы. Из клеточной линии А549, представляющей собой карциному легкого человека, были созданы сфероиды методом силиконовых микромолдов. Диаметр сфероидов на 6 день культивации составлял 80 5 мкм. Сфероиды высаживались на подложки трех различных типов: культуральный пластик, коллагеновый гель концентрацией 1 мг/мл и стерильный децеллюляризиро-ванный матрикс, представляющий собой срез крысиного легкого толщиной 15 мкм. Сфероиды окрашивались витальным ядерным красителем Hoechst 33342, высаживались на подложки и наблюдались в течение 12 часов. Самая быстрая скорость миграции клеток из тела сфероида наблюдалась в случае коллагеновой подложки: 65% относительно первоначального радиуса за 4 часа. Сфероиды на пластике отличались более плавным ростом (38% за 4 ч), однако к 10 часам радиус зоны миграции клеток на пластике стал равен радиусу зоны миграции клеток на коллагене (92%). В случае сфероидов, высаженных на матрикс, клетки начали мигрировать на 2 часа позже клеток на коллагене и пластике (6 ч). Миграция клеток на матриксе (50% за 8 ч, 97% за 12 ч) сравнима с миграцией по пластику (56% за 8 ч, 1 04% за 12 ч), однако имеет свои особенности.