Analiz protivoopukholevykh svoystv vnekletochnykh vezikul mezenkhimnykh stvolovykh kletok so sverkhekspressiey rodstvennogo faktoru nekroza opukholi apoptoz-indutsiruyushchego liganda (TRAIL)

Abstract

Full Text

Практически все клетки человека высвобождают внеклеточные везикулы (ВВ) - это окруженные мембраной сферические микро- и наноструктуры, отделяющиеся от клетки и участвующие в межклеточной коммуникации. ВВ представляют собой перспективный инструмент для доставки биоактивных молекул в терапевтических целях. Одним из перспективных цитокинов с противоопухолевой активность является родственный фактору некроза опухоли апоптоз-инду-цирующий лиганд (TRAIL), способный избирательно вызывать гибель опухолевых, но не здоровых, клеток организма. Идеальным типом клеток для получения ВВ являются мезенхимные стволовые клетки (МСК), поскольку они способны мигрировать в опухолевые ниши. Причем, выделенные из МСК ВВ сохраняют эту способность родительских клеток. В настоящей работе МСК человека были выделены из жировой ткани человека и трансдуцированы рекомбинантным лентивирусом, кодирующим кДНК гена TRAIL (МСК-TRAIL) или гена дальнего красного флуоресцентного белка Katushka-2S (МСК-Katushka-2S). Сверхэкспрессия TRAIL была подтверждена ПЦР-РВ и вестерн блот анализом. Экспрессия Katushka-2S оценивалась с помощью флуоресцентной микроскопии. Из МСК были выделены ВВ, размер которых составил 50-200 нм в диаметре. Иммунофенотипический анализ показал, что полученные ВВ несут маркеры МСК CD44, CD90 и CD105, однако экспрессия CD29 и CD73 была значительно снижена. Для оценки влияния ВВ из нативных и генетически модифицированных МСК на пролиферативную активность и жизнеспособность клеток нейробластомы человека SH-SY5Y, 5х104 клеток культивировалось совместно с 20 мкг/мл ВВ из нативных МСК, МСК-Katushka^S или МСК-TRAIL в течение 24 часов. Пролиферативная активность SH-SY5Y после культивирования с ВВ из МСК-TRAIL снизилась на 12,85±0,51% процентов по сравнению с пролиферативной активностью SH-SY5Y, культивировавшихся в отсутствии ВВ. Число живых клеток SH-SY5Y было существенно ниже (68,03±1,54%) после культивирования с ВВ из МСК-TRAIL по сравнению с клетками, которые культивировались без ВВ (86,6±0,82%), с ВВ из нативных МСК (83,6±0,46%) и МСК-Katushka^S (82,48±1,12%). Из полученных данных можно сделать вывод, что использование МСК-TRAIL может быть эффективно в терапии онкологических заболеваний. Однако, требуются дальнейшие исследования эффективности МСК-TRAIL на животных моделях опухолей in vivo.