Immunnyy otvet laboratornykh zhivotnykh (CBF myshey) na bakteriofag semeystva Podoviridae pri razlichnykh tipakh ego vvedeniya

Abstract

Full Text

В настоящее время накоплены многочисленные данные, свидетельствующие о влиянии микробиоты кишечника на жизненно важные процессы, протекающие в организме животных и человека, и о связи состава микробиоты с развитием ряда патологических состояний. Изучение влияния потенциальных регуляторов микро-биома (бактериофагов) на иммунную систему являлось основной задачей нашего исследования. Очищенный препарат потенциально-терапевтического протейного бактериофага PM16 (полученный в Институте химической биологии и фундаментальной медицины СО РАН, V.V. Morozova et al., 201 6) был использован для исследования его иммуногенности in vivo при различных способах введения мышам линии СBF. Бактериофаг в количестве 1мкл/мышь, разведенный в 200 мкл 0,9% NaCl, вводили три раза с интервалом в три недели. Всего было сформировано 4 группы по 10 мышей в зависимости от способа введения: № 1 - внутривенное введение в хвостовую вену; № 2 - внутрибрюшинное введение; № 3 - введение per os; № 4 - контроль - интактные мыши. Через две недели после последней вакцинации был произведен забор сыворотки, перитонеальных макрофагов. Перитонеальные макрофаги в концентрации 200 тыс./мл помещали в культуральные флаконы на 2 часа для прилипания; затем культуральную среду удаляли и прилипшие клетки культивировали в бес-сывороточной среде в течение 48 часов. Собранные супернатанты замораживали и далее использовали для определения содержания индуцируемой nitric oxide synthase (IN0S) методом ELISA (Cusabio Biotech Co, Cat CSB-E08326m). В сыворотке крови экспериментальных мышей определяли концентрацию IFN-gamma и IL-4. Результаты показали, что концентрация провос-палительного IFNy зависит от способа введения: при внутривенном введении, концентрация IFNy снижена по сравнению с контролем (p=0,005), а при внутрибрю-шинном введении - повышена по сравнению с контролем (p=0,02). Также было отмечено, что введение бактериофага per os приводит к достоверно значимому увеличению продукции противовоспалительного ци-токина IL-4 (р=0,01 ). Эти изменения свидетельствуют об активации Т-клеточного звена иммунитета. Влияния введения фага на продукцию IN0S перитонеальными макрофагами в перечисленных группах мышей не обнаружено, что свидетельствует об отсутствии активации неспецифического звена иммунитета.