Analiz vzaimodeystviya vnekletochnykh vezikul kletok kartsinomy tolstoy kishki s T-limfotsitami cheloveka in vitro

Abstract

Full Text

Внеклеточные везикулы (ВВ) опухолевых клеток благодаря способности сливаться с клетками-реципиентами посредством эндоцитоза и высвобождать свое содержимое в цитоплазму клетки-реципиента рассматриваются как перспективный вектор для целевой доставки различных противоопухолевых агентов. Выделенные из опухолевых клеток ВВ несут на поверхности те же антигены, что и родительские клетки, таким образом, являясь перспективным источником опухолевых антигенов для их презентации клеткам иммунной системы. Благодаря вышеописанным свойствам ВВ опухолевых клеток могут быть использованы для разработки терапевтических вакцин для лечения онкологических заболеваний. Целью настоящей работы явилось проанализировать взаимодействие ВВ клеток карциномы толстой кишки с Т-лимфоцитами человека in vitro. Материалы и методы. ВВ были получены из клеточной линии карциномы толстой кишки HCT 116 (ATCC® CCL-247 ™). Мононуклеарные клетки из периферической крови (МКПК) выделяли путем центрифугирования в градиенте плотности фиколла (1,077 г/ см3). Далее к МКПК, культивируемым в среде RPMI с добавлением 10% сыворотки крови плодов коровы, добавляли ВВ в концентрации 20 мкг/мл. В качестве контроля использовали МКПК без добавления ВВ. Совместное культивирование МКПК и ВВ проводили в течение 3 суток, после чего МКПК окрашивали с помощью следующих антител к CD3, CD4, CD8a, CD38, CD56, CD107a, содержащих флуоресцентную метку (все Biolegend, США). Результаты анализировали с помощью проточной цитофлуориметрии на приборе FACS Aria III (BD Biosciences), с использованием программного обеспечения FACSDiva. Взаимодействие ВВ и МКПК исследовано с помощью лазерной конфокальной микроскопии. Результаты и их обсуждение. Нами показано, что при совместном культивировании ВВ клеток HCT 116 способны сливаться с МКПК, что приводит к их активному взаимодействию. С помощью проточной ци-тофлуориметрии показано, что добавление ВВ клеток HCT 116 к МКПК увеличивает количество CD3+ Т-лимфоцитов на 5% по сравнению с контрольными клетками без добавления ВВ. При этом не было отмечено статистически значимых различий в составе других исследуемых популяций. Таким образом, благодаря способности представлять опухолевые антигены клеткам иммунной системы ВВ опухолевых клеток являются перспективным объектом для разработки новых методов терапии онкологических заболеваний. Однако необходимы дальнейшие исследования в данной области для изучения механизмов взаимодействия ВВ с иммунными клетками и возможных путей регуляции иммунного ответа.