Adgeziya i zhiznesposobnost' fetal'nykh fibroblastov cheloveka, kul'tiviruemykh na 3D-pechatnom matrikse iz polikaprolaktona

Abstract

Full Text

Одним из важных вопросов тканевой инженерии является применение искусственных материалов, в качестве тканевых матриксов, обладающих как соответствующими прочностными характеристиками, биосовместимостью, так и биодеградируемостью. Среди подобных материалов поликапролактон (ПКЛ) является одним из наиболее перспективных. ПКЛ может быть использован при изготовлении тканевых матриксов различными методами, такими как электроспиннинг, 3D-печать и др. Данный материал активно применяется для протезирования костной ткани, изготовлении кожных и сосудистых тканевых эквивалентов. В большинстве случаев, для успешного формирования тканевых эквивалентов важна адгезия клеточных компонентов с матричным материалом. В данной работе мы оценивали способность адгезии фетальных фибробластов человека (ФФЧ) к ПКЛ-матриксу, полученному методом 3D-печати, а также оценивали жизнеспособность адгезированных ФФЧ. ПКЛ-матрикс был получен с помощью 3D-печати методом послойной укладки полимера под разными углами в горизонтальной плоскости. Полученный многослойный блок размером 10x10x25 мм имел ячеистую структуру (толщина нити 150 мкм). На поверхность блока наносили 200 мкл клеточной суспензии в концентрации 1 млн/мл в ростовой среде DMEM/F12 с 10% ФТС и инкубировали в течение 2 ч в СО2-инкубаторе при стандартных условиях. Затем блоки переносили в ростовую среду для дальнейшего культивирования. Чтобы избежать миграции клеток, блоки располагали на вазелиновой подложке. В работе были использованы ФФЧ 5-го пассажа. Жизнеспособность адгезирован-ных ФФЧ оценивали методом с витальным красителем ресазурином в течение 4 дней. Срезы образцов для микроскопического исследования окрашивали по методу Гимза. В качестве дополнительного метода визуализации адгезированных к матриксу клеток использовалась сканирующая электронная микроскопия. Согласно полученным результатам, ФФЧ успешно ад-гезировали к ПКЛ-матриксу. Уровень жизнеспособности линейно увеличивался, и на 4 день был более чем в 2 раза выше, по сравнению с первым днём культивирования. В итоге исследования было подтверждено, что ПКЛ является перспективным материалом для использования в тканевой инженерии за счёт адгезивной поверхности и поддержания жизнеспособности клеточных культур человека.