Sozdanie ksenograftnoy modeli neyroblastomy cheloveka na immunokompetentnykh myshakh

Abstract

Full Text

Микроокружение опухоли представляет собой динамическую среду, состоящую из различных типов клеток, в том числе и мезенхимных стволовых клеток (МСК). Животные модели ксенографтов опухолей имеют важное значение при исследований процессов онкогенеза в условиях in vivo. Однако использование иммунодефи-цитных мышей ограничены в своей информативности из-за отсутствия иммунной системы у животных. Важное значение для роста и формирования опухоли оказывают клетки иммунной системы и МСК. Целью нашей работы являлось создание ксенографтной модели опухоли в теле иммунокомпетентной мыши путем подкожного введения генетически модифицированных клеток нейробластомы человека, экспресирующих биолюминесцентный белок люциферазы светлячка (SH-SY5Y-ffLuc). Полученные опухолевые модели будут использоваться для дальнейших исследований процессов онкогенеза и определения влияния МСК на опухолевый рост. Генетическую модификацию SH-SY5Y проводили с помощью рекомбинантного лентивируса LV-ffLuc. Для получения стабильной линии SH-SY5Y-ffLuc клетки культивировали в присутствии селективного антибиотика пуромицина (Sigma-Aldrich, США) в концентрации 1 мкг/мл, концентрация антибиотика определяли заранее с помощью MTS-теста в различных концентрациях. Анализ биолюминесценции in vitro оценивали добавлением к клеткам субстрата 0NE-Glo™ Luciferase Assay System. Было отмечено, что SH-SY5Y-ffLuc сохраняли биолюминесцентные свойства в течение длительного периода времени. Ксенографтную модель получали путем подкожной инъекции SH-SY5Y-ffLuc (3x106) в 300 мкл суспензии Matrigel Matrix (1:1) 6-недельным самцам мышей C57BL/6. Для in vivo визуализации через сутки и 30 дней после введения SH-SY5Y-ffLuc, животным вводили внутрибрюшинно D-люциферин, растворенный в фосфатно-солевом буфере, в дозе 1 50 мг/кг. Изображения получали спустя 3 мин после введения субстрата серийно, каждые 10 мин., в течение 30 мин., в ходе которой была отмечена стабильная биолюминесценция. Таким образом, подкожная ксенотрансплантация опухолевых клеток нейробластомы человека иммунокомпе-тентной мыши является удачной. Полученные нами данные могут способствовать дальнейшим исследованиями в отношении разработки ксенографтной модели и использоваться для разработки системы скрининга при тестировании новых противоопухолевых средств.