K kharakteristike vnekletochnykh vezikul plyuripotentnykh stvolovykh kletok cheloveka

Abstract

Full Text

Исследования механизмов, регулирующих участие стволовых клеток человека в обеспечении регенерационных способностей тканей, открывают широкие перспективы их применения в регенерационной биомедицине. Известно, что регенерация ткани может осуществляться не только за счет прямой дифференцировки плюри-потентных стволовых клеток в нужном направлении, но и за счет их участия в специфической регуляции репарационных процессов. В связи с этим, большой практический интерес представляет изучение компонентов па-ракринной секреции стволовых клеток, обеспечивающих межклеточную коммуникацию и способных регулировать морфофункциональное состояние клеток. Одними из таких паракринных регуляторных компонентов стволовых клеток являются секретируемые ими внеклеточные везикулы, представляющие собой мембранные замкнутые цитоплазматические фрагменты и содержащие различный набор белков, липидов, нуклеиновых кислот. Сопоставление компонентов везикул и самих стволовых клеток может указывать на регуляторный аспект пара-кринной функции клеток. В данной работе мы сопоставили наличие ряда ключевых характеристических факторов в эмбриональных стволовых клетках человека (ЭСК) и во внеклеточных везикулах, полученных в ходе их культивирования. В работе были использованы ЭСК человека линии hES-MK05 любезно предоставленные чл.-корр. РАН, д. б. н. М.А. Лагарьковой (ФНКЦ ФХМ ФМБА). Клетки культивировали по стандартной методике, используя в качестве подложки матригель. Внеклеточные везикулы выделяли из среды культивирования ЭСК методом последовательного центрифугирования и ультрацентрифугирования по стандартной методике. Концентрация везикул составляла в среднем 4,6х1011 част./мл, 80% детектируемых частиц лежат в диапазоне размеров от 50 до 200 нм, что свидетельствует о присутствии в препаратах как экзосом, так и микровезикул. Результаты просвечивающей электронной микроскопии подтверждают наличие частиц, по морфологии соответствующим везикулам. Проведенный нами молекулярно-генетический анализ (метод ПЦР в реальном времени) показал наличие мРНК генов - основных маркеров плюрипотентности (Oct4, Sox2, Nanog, Lin 28) в самих ЭСК человека линии hES-MK05 и в их внеклеточных везикулах. Таким образом, выявленная идентичность пара-кринного компонента ЭСК может указывать на то, что при сохранении плюрипотентного статуса клеток межклеточные коммуникации направлены на поддержание плюрипотентности.