Fenotipicheskaya kharakteristika klonal'nykh kul'tur, poluchennykh iz subpopulyatsii NK-kletok CD57+NKG2C+

Abstract

Full Text

При инфекции цитомегаловируса в периферической крови человека во многих случаях наблюдается экспансия так называемых адаптивных NK-клеток с фенотипом CD57+NKG2C+. Ряд свойств этой субпопуляции, связанных с эпигенетической перестройкой, позволяет их рассматривать как перспективных агентов противоопухолевой иммунотерапии. С целью определить гетерогенность NK-клеток NKG2C+и их отличие от клеток NKG2C^ ответе на активирующий стимул в данной работе был проведен фенотипический анализ клональных культур, полученных из соответствующиих субпопуляций CD57+. NK-клетки были выделены из периферических мононуклеаров здоровых доноров с помощью магнитной сепарации. Стимуляцию проводили IL-2 с использованием облученных фидерных клеток K562-mbIL21. С помощью клеточной сортировки было получено 6 коллекций клонов из NK-клеток CD57+, CD57+NKG2C^ CD57+NKG2C+. Анализ фенотипа полученных культур был выполнен через 5 недель культивирования с помощью проточной цитометрии. Процентное содержание клеток, экспрессирующих маркер терминальной дифференцировки CD57, в клонах, полученных из субпопуляции CD57+, составляло 56.4 ± 8.7% (среднее ± SE). В то же время, доля CD57+-клеток отличалась в клонах, полученных из NK-клеток, различных по экспрессии NKG2C, составляя 43.2 ± 15.7% и 75.3 ± 9.3% для субпопуляций CD57+NKG2C^ CD57+NKG2C+, соответственно. Более того, в 75% клонов, полученных из клеток CD57+NKG2C+, все клетки в культурах были CD57-позитивными. Интересно, что плотность поверхностной экспрессии активационного маркера HLA-DR была выше в клетках клонов, происходящих из субпопуляции CD57+NKG2C+, по сравнению с клонами из субпопуляции CD57+NKG2C-, хотя не все клетки клонов экспрессировали этот маркер. При этом, плотность поверхностной экспрессии CD1 6 в этих клонах снижалась, что может быть связано с более интенсивной пролиферацией CD57+NKG2C+-NK-клеток в ответ на данный тип стимуляции. Приблизительно половина клонов из субпопуляции CD57+NKG2C- были полностью негативными по KIR2DL2/DL3, тогда как только 18% клонов, полученных из субпопуляции CD57+NKG2C+, не экспрессировало эти ингибирующие рецепторы. Таким образом, большая часть клональных культур, полученных из клеток CD57+NKG2C+, сохраняла такие фенотипические характеристики адаптивных NK-клеток, как экспрессию CD57 и KIR2DL2/DL3, обладала более высоким статусом активации, но более низким уровнем рецепторов антитело-зависимой цитотоксичности CD16.