Klony NK-kletok s fenotipom CD57+NKG2C+ obladayut luchshey zhiznesposobnost'yu, po sravneniyu s klonami, poluchennymi iz subpopulyatsii CD57+NKG2C-

Abstract

Full Text

Цитомегаловирусная инфекция (HCMV) способствует формированию в организме человека особой субпопуляции адаптивных NK-клеток, которые отличаются от обычных NK-клеток рядом функциональных свойств, в частности, повышенной антитело-зависимой клеточной цитотоксичностью. Cубпопуляция ассоциированных с HCMV адаптивных NK-клеток характеризуется фенотипом CD56dimCD57+NKG2A-NKG2C+CD16bright. В данной работе мы изучили различия между NK-клетками NKG2C- и NKG2C+ по эффективности клонирования, а также по выживаемости и продолжительности жизни клональнах культур in vitro. NK-клетки выделяли путем отрицательной магнитной сепарации периферических мо-нонуклеаров, полученных от HCMV-серопозитивных здоровых доноров. Шесть коллекций клонов NK-клеток были получены путем сортировки единичных клеток в 96-лу-ночный планшет. Для стимуляции использовали среду NK-MAСS, дополненную 100 ед./мл IL-2, и модифицированные фидерные клетки K562-mbIL21. Были получены клоны из субпопуляций CD57-NKG2C-, CD57-NKG2C+, CD57+NKG2C- and CD57+NKG2C+. Не было выявлено отличий в эффективности клонирования NK-клеток NKG2C- и NKG2C+. Общее количество клеток в клоне в клональных культурах из субпопуляций NKG2C+ в большинстве коллекций было выше, чем в клонах, полученных из NKG2C--субпопуляций. Различия в доле выживших клонов через 7 недель культивирования от общего количества клонов, оказались меньше для клонов, полученных из клеток CD57-NKG2C- и CD57-NKG2C+ (41% и 57%, соответственно), чем для клонов из субпопуляций CD57+NKG2C- и CD57+NKG2C+ (23% и 66%, соответственно). Выживаемость клонов из субпопуляций CD57-NKG2C- через 5-8 недель оказалась выше, чем в клонах из CD57+NKG2C-. Такие же различия были получены и для клонов из субпопуляций CD57-NKG2C+ и CD57+NKG2C+. Продолжительность жизни была выше в клонах, полученных из NK-клеток NKG2C+, и достигала 13 и более недель. Однако, хорошо пролиферирующие клоны «адаптивных» NK-клеток наблюдались не у всех доноров, даже при одинаковой пропорции NK-клеток NKG2C+. Таким образом, экспрессия NKG2C связана с лучшей пролиферацией и более высокой выживаемостью клонов NK-клеток в ответ на стимуляцию IL-2/K562-mbIL21.