Monoklonal'nye antitela k endoglinu cheloveka vyzyvayut izmeneniya funktsional'nykh svoystv kletok endoteliya EA.hy926 i HUVEC

Abstract

Full Text

Формирование сосудов играет важную роль в процессе эмбрионального развития, при регенерации тканей и при злокачественных новообразованиях. Эндоглин, маркерный белок эндотелия сосудов, входит в состав рецепторного комплекса TGF-p и участвует в различных этапах ангиогенеза: пролиферации, миграции и адгезии эндотелиоцитов. Целью работы являлось сравнение действия двух моноклональных антител (МКАТ, 2С8 и 4Е4) к различным эпитопам эндоглина человека на адгезию, миграцию и на формирование капилляро-подобных структур клетками эндотелия перевиваемой линии EA.hy926 и первичных культур клеток эндотелия пупочных канатиков (HUVEC). Методами ОТПЦР и проточной цитометрии показано, что транскрипционная активность гена Eng и экспрессия мембранной формы белка в клетках HUVEC были выше, чем в эндотелиальных клетках линии EA.hy926. Снижение уровня O2 при культивировании клеток с 20% до 2% приводило к увеличению экспрессии эндоглина. Экспрессия адгезионных молекул CD49e, CD54, CD144 и CD146 на поверхности клеток HUVEC также была выше, чем на клетках EA.hy926. В культурах клеток HUVEC наблюдали торможение миграции клеток в тесте закрытия раны в клеточном монослое при добавлении МКАТ 4Е4. Оба антитела вызывали замедление миграции клеток при культивировании в условиях гипоксии или при добавлении в среду TGF-P1. Торможение миграции клеток EA.hy926 в присутствии обоих МКАТ было отмечено только при добавлении TGF-P1. В отличие от клеток EA.hy926, оба МКАТ к эндоглину вызывали уменьшение распластывания клеток HUVEC на поверхности, покрытой фибронектином. Тем не менее, добавление МКАТ 4Е4 также вызывали изменения адгезионных свойств клеток EA.hy926. В присутствии этого антитела происходило увеличение числа моноцитоподобных клеток U937, прикрепившихся к монослою эндотелия. Нами были получены данные, свидетельствующие о наличии влияния обоих МКАТ к эндоглину на формирование капилляро-подобных структур в матригеле клетками EA.hy926 и HUVEC. Проведенные исследования позволяют заключить, что оба МКАТ вызывают функциональные изменения в культурах эндотелиальных клеток, однако их влияние не идентично. Также наши результаты свидетельствуют о том, что эффекты МКАТ оказываются более выраженными при проведении экспериментов на первичных культурах клеток эндотелия HUVEC, что может быть связано с более высокими уровнями экспрессии эндоглина и адгезионных молекул этих клеток.