Razrabotka novoy metodiki polucheniya dermal'nogo vnekletochnogo matriksa

Full Text

Несмотря на достижения современной хирургии в лечении повреждений кожных покровов актуальным остается поиск новых методов для более быстрого и эффективного заживления ран. Тканевая инженерия, несомненно, представляет интерес для разработки таких технологий. Цель данной работы состояла в определении оптимального протокола получения децеллюляризированно-го дермального матрикса для последующей разработки тканеинженерной кожи. Материалы и методы. Экспериментальным животным был 1 поросенок породы Ландрас. После предварительной обработки кожи дерматомом забирали образцы толщиной 0,3 см. В работе проводили сравнительный анализ 2 протоколов децеллюляризации: протокол № 1 на основе применения тритон Х100 и де-зоксихолата, протокол № 2 только на основе дезокси-холата. Всего циклов обработки по 2 протоколам было 5 с общей продолжительностью проведения децеллюля-ризации в течение 40 часов. Ацеллюлярные матриксы после обработки были исследованы следующим образом: гистологический анализ, количественное определение содержания ДНК во влажной ткани. Далее была проведена статическая рецеллюляризация матриксов фибробластами дермы свиньи. После чего матриксы были исследованы на цитотоксичность с помощью ХТТ-теста и теста на дифференциальное окрашивание живых и погибших клеток. Результаты: Проведенный сравнительный анализ двух протоколов децеллюляризации дермы свиной кожи показал, что оба протокола эффективно удаляют клетки и ядерный материал. Количественный анализ показал, что содержание ДНК в децеллюляризированной дерме снижалось до 19,8% (65,4 нг/мг ткани) и 12,1% (40,1 нг/мг ткани) по протоколу № 1 и № 2 соответственно. Культивированные клетки сохраняли свою жизнеспособность на обоих полученных матриксах в течение 72 часов. ХТТ-тест выявил в обоих опытных образцах живые, метаболически активные клетки. Однако жизнеспособность клеток оказалась выше на матриксе, децеллю-ляризированном по протоколу № 1. Дифференциальное окрашивание живых и мертвых клеток показало, что 80±10% клеток оставались жизнеспособными на матриксе № 1 и 55±10% на матриксе № 2. Заключение. Полученные результаты позволили нам считать более перспективным для последующего изучения и проведения исследований in vivo именно комбинированный протокол на основе применения Тритон Х100 и дезоксихолата натрия.

About the authors

Aleksandr Sergeevich Sotnichenko

Email: alex24.88@mail.ru

Irina Valer'evna Gilevich

Karina Igorevna Melkonyan

Yana Andreevna Yutskevich

Anton Vladimirovich Karakulev

Sergey Borisovich Bogdanov

Il'ya Mikhaylovich Bykov

Vladimir Alekseevich Porkhanov

Andrey Nikolaevich Red'ko

Sergey Nikolaevich Alekseenko

References

Supplementary files