Sravnitel'nyy analiz diametrov mezenkhimnykh stvolovykh kletok kostnogo mozga krolika na raznykh passazhakh kul'tivirovaniya

Abstract

Full Text

Размер клетки является важным параметром при введении стволовых клеток в кровеносное русло, влияющим на эффективность терапии. Известно, что при длительном культивировании in vitro и многократном пассировании с целью увеличения количества клеток могут происходить некоторые функциональные и морфологические изменения клеточных характеристик, в частности, морфометрические. Поэтому необходимы достоверные знания о размерах клеток на разных пассажах. Цель данной работы состояла в анализе популяции (первичной культуры) мезенхимных стволовых клеток (МСК) костного мозга кролика в процессе пассирования in vitro по показателю - диаметр клетки. Материалы и методы. В работе использовали МСК костного мозга, выделенные из конечностей новорожденного кролика породы Шиншилла (питомник «Рапполово») 2, 5 и 11 пассажей. Морфометрические параметры (количество клеток с определенным диаметром) получали с помощью автоматического счетчика клеток ТС20тм (Bio-Rad, США) и программного пакета. Результаты. Было выявлено, что на 2 пассаже культивирования первичной культуры МСК диаметр жизнеспособных клеток варьировал от 10 до 29 мкм. Большинство клеток (67%) было сосредоточено в интервале от 15 до 24 мкм. Средний размер клеток составлял 19,8 мкм. Больше всего было представлено клеток диаметром 20 мкм (13%). Анализ популяции клеток 5 пассажа показал, что морфометрические показатели изменились. Так, верхняя граница диапазона распределения клеток по диаметрам снизилась до 26 мкм, основная доля (65%) популяции приходилась на клетки диаметром от 12 до 20 мкм, средний размер составлял 18,45 мкм. Больше всего в популяции присутствовало клеток диаметром 14 мкм (17,6%). При дальнейшем пассировании (11 пассаж) произошло расширение диапазона размеров клеток от 10 до 29 мкм, средний диаметр составил 20,4 мкм. Основная часть клеток (72%) находилась в размерном ряду от 16 до 26 мкм. Больше всего встречалось клеток диаметром 24 мкм (17%). Анализ распределения диаметров МСК на разных пассажах показал, что наиболее гомогенной по размерам является популяция клеток 5 пассажа. Кроме того, эти клетки показывали наименьший средний диаметр клетки в популяции. Однако следует учитывать возможные индивидуальные особенности клеточных параметров для каждого образца. Поэтому рекомендуется проводить тестирование клеточной популяции в процессе пассирования по распределению диаметров клеток в популяции для определения оптимального пассажа, пригодного для использования в терапевтических целях.