Izuchenie vliyaniya RGPU 260 na rost neyritov v organotipicheskoy kul'ture nervnoy tkani v prisutstvii syvorotki krovi bol'nykh spinal'noy myshechnoy atrofii 2 tipa

Abstract

Full Text

Введение: ранее был выявлен нейритингибирую-щий эффект сыворотки крови больных спинальной мышечной атрофией (СМА) 2 типа в органотипической культуре нервной ткани. Цель исследования: изучение влияния РГПУ 260 на процесс ингибирования роста нейритов, в эксперименте с органотипической культуре нервной ткани в присутствие сыворотки крови больных СМА 2 типа. Материалы и методы: 1 600 сенсорных ганглиев 10-12-дневных куриных эмбрионов, культивируемых в чашках Петри на подложках из коллагена в СО2-инкубаторе («Sanyo», Япония) в течение 3 суток при 36,5°С и 5% СО2. Контрольные эксплантаты культивировали в питательной среде стандартного состава. 900 ганглиев - культуральная среда и сыворотка крови больных СМА 2 типа (n=12); 700 - ганглиев сыворотка крови больных СМА 2 типа и РГПУ 260 (мефебут : L-аргинина гидрохлорид, 1 : 1) (10-5М). Для визуализации объектов использовали микроскоп AxiostarPlus (Carl Zeiss, Германия). Полученные изображения анализировали с помощью программы ImageJ. Работа выполнена на оборудовании ЦКП «Конфокальная микроскопия». Для количественной оценки роста эксплантатов спинальных ганглиев применяли морфометрический метод. Индекс площади (ИП) рассчитывали как отношение площади зоны роста эксплантата к исходной площади. Контрольное значение ИП принимали за 100%. Статистическую обработку результатов проводили с помощью t-критерия Стъюдента. Результаты и обсуждение: сыворотка крови 12 больных СМА 2 типа была исследована в широком диапазоне разведений (1:100-1:2). В разведениях 1:2, 1:10, 1:50, 1:70 сыворотка больных полностью блокировала рост нейритов сенсорных ганглиев. Индекс площади исследуемых эксплантатов был ниже контрольных значений в среднем на 25%. При дальнейшем разведении сыворотка крови на рост нейритов не влияла. Культивирование сенсорных ганглиев в среде, содержащей плазму пациентов со СМА 2 типа (1:70) и РГПУ 260 (мефебут: L-аргинина гидрохлорид,1:1) (10-5 М) устраняло нейритингибирующий эффект плазмы. Индекс площади экспериментальных эксплантатов практически не отличался от контрольного значения. Полученные результаты свидетельствуют о том, что РГПУ 260 оказывает нейротрофотропное влияние на сенсорные ганглии, усиливая рост нейритов в присутствии сыворотки крови больных СМА. Выводы: выявленное нейротрофотропное действие РГПУ 260, в серии экспериментов в органотипической культуре нервной ткани в присутствии сыворотки крови больных СМА 2 типа, по нашему мнению, связано с влиянием этого препарата на синтез эндотелиальной NO-синтазы.