Na etapakh razrabotki tekhnologii formirovaniya konstruktov shchitovidnoy zhelezy cheloveka

Abstract

Full Text

Актуальность создания функционально активных конструктов щитовидной железы обусловлена неадекватностью заместительной гормонотерапии у пациентов, перенесших тиреоидэктомию по поводу доброкачественных или злокачественных новообразований. Терапевтические гормоны обеспечивают медленный подъем их концентрации в кровеносном русле с последующим монотонным убыванием без учета реальных потребностей организма. Целью работы являлась разработка методик выделения, культивирования и масштабирования тиреоцитов (ТЦ), тиреоидных фолликулов (ТФ) и микроорганных (МО) культур ЩЖ человека как этапа создания тканеинженерных конструкций (ТИК). Объектами исследования служили фрагменты нормальной ЩЖ, полученные после тиреоидэктомии по поводу рака (n=31). ТЦ, ТФ и МО получали механической дезагрегацией ткани ЩЖ с последующим фильтрованием через серию сит. ТЦ, ТФ и МО культивировали (до 4,5 мес.) на полупроницаемых мембранах на границе раздела сред - поверхности гидрогеля на основе лизата тромбоцитов (ЛТ) человека и воздуха. В отдельной серии экспериментов МО культивировали на мембране в жидкой ростовой среде, обогащенной ЛТ. На этапах экспериментов в культурах оценивали долю жизнеспособных клеток (окраска Dil, МТТ), пролиферирующих клеток (экспрессия Ki67), способность захватывать йод (экспрессия NIS) и синтезировать тиреоглобулин, а также долю стволовых предшественников ТЦ (экспрессия Oct3/4). Также на этапах экспериментов осуществляли прижизненную морфометрию. Было установлено, что при 3D-культивировании одиночных ТЦ происходит быстрая (за 7 дней) селекция минорной (<5%) популяции 0ct3/4+ клеток, формирующих «гнезда» из нескольких клеток, а далее - ТФ (в стенке которых выявляются Ki67+ клетки) с эпителиальной полярностью ТЦ и способностью синтезировать ТГ. При 3D-культивировании ТФ до 2-х месяцев происходит увеличение их размеров (на 13,9±1,3%), при этом ТФ сближаются и ассоциируют. В их стенке выявляются Ki67+клетки. ТЦ в ТФ через 4,5 мес. сохраняют способность синтезировать ТГ. При 3D-культивировании МО ЩЖ в течение 21 дня в них сохраняется фолликулярная структура, ТЦ в ТФ способны захватывать йод и синтезировать ТГ (NIS+, ТГ+). В ТФ визуализируются единичные Ю67+ клетки. Вокруг МО развивается соединительная ткань, объединяющая МО в единую структуру. По ее периферии выявляются единичные фибробластоподобные Ю67+ клетки. Таким образом, нами была разработана система для 3D-культивирования структур ЩЖ человека разного уровня организации (ТЦ, ТФ, МО) как основа для создания ТИК.