Autotransplantation of olfactory analyzer lining cells for Spinal Cord Injury treatment - Australian study

Full Text

В настоящее время в нескольких странах мира запущены сразу несколько клинических испытаний различных методов клеточной трансплантации для лечения травмы спинного мозга [ТСМ] [1-3]. Метод трансплантации обкладочных клеток обонятельного анализатора или обкладочных обонятельных клеток [ООК, olfactory ensheathing cells - ОЕС] при ТСМ, продемонстрировавший эффективность в нескольких десятках экспериментальных протоколов, в настоящее время проходит І-ІІ фазу клинических испытаний в Китае [6], Португалии [5, 7], Австралии [4] и России [8]. По неофициальным данным, этой процедуре подверглись около 500 человек. Большая часть из них лечилась в Китае клетками, выделенными из обонятельной луковицы абортированных плодов человека [6]. Однако во всех этих исследованиях, группы пациентов значительно различались по возрасту, времени и локализации травмы, не были рандомизированы. Кроме того, нет данных по фенотипической характеристике клеточного материала [6]. Результаты некоторых пилотных испытаний не публиковались и не обсуждались [7, 8]. Таким образом, до сих пор нельзя однозначно говорить о клинической эффективности данного метода.

ОЕС обонятельной луковицы или «нейроэпителия» обонятельной области слизистой оболочки носа имеют глиальную природу и способны пролиферировать в культуре. Многочисленные эксперименты показали, что эти клетки, подобно шванновским, через неясные механизмы способны стимулировать аксональную регенерацию и вызывать ремиелинизацию [4] в области повреждения спинного мозга.

В недавнем номере журнала Brain были опубликованы результаты I фазы слепого, контролируемого клинического испытания метода аутотрансплантации ОЕС пациентам с ТСМ, проходившего в Австралии. Перед началом клинических испытаний авторами было показана возможность выделения необходимого количества ОЕС [10] из слизистой оболочки носа пациентов, без нарушения обоняния [9]. Более 50 опубликованных экспериментальных протоколов и собственный опыт группы послужили основанием к началу клинических испытаний. Целью исследования явилась оценка осуществимости метода и его безопасности в течение года после трансплантации.

Из 600 рассматриваемых запросов в исследование включили 21 человека, из которых после тщательного отбора выполнили трансплантации троим. Ещё 3 пациента вошли в контрольную группу. Основными включающими критериями стали: повреждение спинного мозга травматического генеза с полным функциональным перерывом, уровень повреждения Т4-Т10, неврологически стабильное состояние ASIA [American Spinal Injury Association] класс A и адекватный психо-социальный статус пациентов [для возможности долговременного наблюдения].

ОЕС выделяли по описанному ранее протоколу из биоптатов обонятельной области слизистой оболочки носа пациентов и культивировали в течение 4-10 недель перед трансплантацией [9, 10]. Через 1-2 недели ОЕС приобретали типичный «глиальный» фенотип - GFAP⁺ [> 95%], S100⁺/p75⁺ [76-88%] и не экспрессировали маркёр шванновских клеток - HNK-1 [что исключало контаминацию ими культуры].

Трехмерная реконструкция начального отдела обонятельного анализатора:

1. - нейросенсорные клетки с ресничками;
2. - поддерживающий эпителиоцит; 3 - базальные клетки;

4 - olfactory ensheathing cells; 5 - lamina cribrosa решетчатой кости; 6 - слизь

По Greep R.O., Weiss L. [1973], с изменениями

Клетки вводили во время нейрохирургического вмешательства в несколько точек по разным траекториям в место повреждения и вокруг него. Общее количество вводимых клеток составляло 1,12, 2,24 и 3,28 миллионов соответственно. Для точного дозированного введения применяли микрохирургическую технику и специально разработанный аппарат, состоящий из инъектора и микроманипулятора.

В результате исследования было показано, что метод не несёт в себе никаких побочных эффектов и осложнений как непосредственно во время трансплантации, так и в ближайший и отдалённый послеоперационный период. Это было подтверждено как клинически, так и с использованием магнитно-резонансной томографии. Время наблюдения пока составило 1 год. Пациенты будут находиться под наблюдением до 3 лет. Клиническую эффективность метода не оценивали.

Это исследование показывает современный подход к проекту клинического испытания метода клеточной трансплантации в рамках доказательной медицины. Тщательный отбор пациентов и разработка включающих и исключающих критериев, согласно международным рекомендациям к испытаниям при ТСМ [11], позволяют достоверно оценить эффект метода и «стандартизировать» процедуру. Авторы подчёркивают, что тщательная разработка методики забора клеточного материала, подготовки трансплантата и его пересадки позволила избежать таких возможных осложнений как потеря обоняния, посттравматические кисты и сирингомиелия.

Однако, применение ОЕС остаётся дискутабельной темой в лечении ТСМ. Это связано с тем, что до сих пор нет единого мнения по идентификации и маркированию этих клеток. Проблема усугубляется ещё и тем, что ряд исследовательских групп заявляет о наличии другой популяции - мультипотентных стволовых клеток в обонятельной области слизистой оболочки носа человека [14], в дополнение к ОЕС, которые не являются стволовыми. В этой работе было показано, что все клетки не имели HNK-1, однако это не исключает контаминацию культуры шванновскими клетками на 100%, поскольку не все они несут этот маркёр. Кроме того, в работе Takami было показано, что трансплантация шванновских клеток при ТСМ значительно эффективней, чем трансплантация ОЕС [12]. В одной из недавних работ [13], не выявившей эффективности метода при ТСМ, дискутируется целесообразность трансплантации ОЕС больным людям и подчёркивается, что экспериментальных исследований выполнено явно недостаточно, чтобы перенести технологию в клинику. Эта дискуссия ещё раз показывает, что для оценки клинической эффективности метода необходима разработка и принятие единых протоколов испытаний, включающих характеристику клеточного материала и критерии отбора пациентов для трансплантации. Тем не менее, II фаза испытаний, начавшаяся в настоящее время в ряде центров, призвана ответить на вопрос о клинической эффективности метода и целесообразности продолжения внедрения технологии.

About the authors

A. V. Bersenyev

Author for correspondence.
Email: redaktor@celltranspl.ru
Russian Federation

References

Supplementary files

Supplementary Files

Action

1. JATS XML

Download

2. Three-dimensional reconstruction of the initial part of the olfactory analyzer

Download (161KB)

Indexing metadata