Poluchenie iz embrional'nykh stvolovykh kletok myshi kletok s fenotipom podobnym monotsitam i makrofagam

Abstract

Full Text

Моноциты и тканевые макрофаги являются мишенью для многих лентивирусов животных. Дифференцировка эмбриональных стволовых клеток (ЭСК) в этом направлении представляет интерес для создания новой восприимчивой клеточной модели in vitro с целью изучения процессов, которые происходят во взаимоотношениях клетка-вирус в результате лентивирусной инфекции. ЭСК являются уникальной моделью для изучения молекулярных механизмов клеточной дифференциров-ки, в частности раннего гематопоэза. Условия диффе-ренцировки ЭСК в макрофаги в культуре отличаются, и представляло интерес их оптимизировать. В качестве объекта использовали ЭСК мыши линии Д3. Индукцию к дифференцировке осуществляли посредством пассирования клеток в высокой плотности в чашках Петри без фидерного слоя. Колонии ЭСК собирали, не разбивая их, и высевали агрегатами (100-200 мкм в диаметре) в низкой плотности по 10-20 агрегатов на см2 в чашки Петри, блокирующие клеточную адгезию с целью формирования эмбриональных телец (ЭТ), а в ростовую среду добавляли рекомбинантный интерлейкин 3 и гра-нулоцитарно-макрофагальный колониестимулирующий фактор. На 12 сут. такого культивирования ЭТ собирали и обрабатывали ферментами для получения отдельных клеток. Доля клеток, положительно окрашенных АТ против АГ CD34 и CD45, составляла 43% и 25%, соответственно. Для подтверждения дифференцировки в этом направлении использовали полужидкую метилцеллюлоз-ную среду, в которую вносили те же рекомбинантные ци-токины. Анализ полученных результатов продемонстрировал формирование колоний с различной морфологией с эффективностью 0,33% (33±0,4 на 10000 клеток). Иммуноцитохимический анализ выбранных по морфологии для анализа колоний продемонстрировал окраску клеток АТ против CD11b, CD11c, F4/80, что свидетельствует о получении в культуре моноцитов и тканевых макрофагов посредством индукции мышиных ЭСК. Обнаружение в колониях моноцитов и макрофагов, свидетельствует о том, что данные клеточные типы взаимосвязаны. Полученные результаты дают возможность изучать биологию этих клеток in vitro и открывают новые возможности для изучения зависимости репликации лентивирусов, в частности, вируса инфекционной анемии лошадей от степени цитодифференцировки.