Tekhnologiya polucheniya i morfofunktsional'nyy analiz tkanespetsificheskogo karkasa iz fragmenta donorskoy podzheludochnoy zhelezy

Abstract

Full Text

Одной из актуальных задач создания функционально активной ткани поджелудочной железы является разработка тканеспецифического каркаса, способного имитировать для островков Лангерганса необходимое микроокружение биологической среды. Цель работы: получение тканеспецифического каркаса из децеллюляризованных фрагментов поджелудочной железы человека (ПЖ). Материалы и методы. Протокол децеллюляриза-ции включал в себя 3 цикла замораживания и оттаивания фрагментов ПЖ с последующим механическим измельчением ткани и отмывкой в трех сменах буферного раствора (рН = 7,4), содержащего растворы 0,1% доде-цилсульфата натрия и повышающуюся концентрацию Тритона Х100 (1, 2 и 3%, соответственно). На каждом этапе децеллюляризации проводили рутинное окрашивание образцов гематоксилином и эозином, DAPI, на общий коллаген (метод Массона) и на эластические волокна (метод Унны-Тенцера). Дополнительно, проводили иммуногистохимический анализ срезов децеллю-ляризированных фрагментов ПЖ на коллаген 1 типа. Определяли количество ДНК в нативной и децеллюля-ризованной ткани ПЖ и исследовали цитотоксичность полученных образцов. Результаты. Гистологическое исследование показало, что в процессе проведения децелллюляризации в образцах фрагментов ткани ПЖ не было обнаружено сохранившихся клеток, клеточных ядер и продуктов кари-орексиса, зерен детрита. Соединительнотканный каркас представлен тонковолокнистой сетевидной структурой, позитивно окрашенной по методу Массона, по методу Унны-Тенцера и на коллаген 1 типа. Было установлено, что при де-целлюляризации ПЖ в ткани сохранилось лишь около 0,1% ДНК. Полученные результаты показали отсутствие цитотоксичности децеллюляризованной панкреатической ткани. Выводы. Предложенный протокол децеллюляриза-ции фрагментов донорской ПЖ является эффективным и позволяет получить свободный от клеток и клеточных фрагментов тканеспецифический матрикс с низкой им-муногенностью, в составе которого идентифицируется коллаген 1 типа и эластин. Полученный матрикс не проявляет признаков цитотоксичности и может в дальнейшем использоваться для рецеллюляризации островками Лангерганса.