Primenenie virusnykh vektorov dlya izucheniya neyrogeneza u zhivotnykh in vivo

Abstract

Full Text

Нейрогенез активно изучается как эндогенный процесс регенерации при ряде заболеваний мозга, таких как ишемия головного мозга, рассеянный склероз, болезнь Паркинсона и др. Возможность терапевтического восстановительного воздействия на пораженные заболеванием участки мозга напрямую зависит от понимания биологии клеток, участвующих в нейрогенезе, но их изучение in vivo затруднено. Сравнительно недавно описан метод неинвазивного изучения нейрогенеза на животных in vivo посредством маркирования клеток, определяющих нейрогенез, - предшественников нейронов, векторами, несущими трансген ферритина, в результате чего нейрогенез может быть визуализирован при помощи МРТ. В данном исследовании были проверены на эффективность трансфекции in vivo на здоровых крысах линии SD несколько векторов на основе лентивируса (LV) и аденоассоциированного вируса (AAV). Вектор на основе LV включал два трансгена под контролем промотора даблкортина (DCX), специфического для предшетственников нейронов: последовательность тяжелой цепи человеческого фер-ритина и зеленого фллуоресцентного белка (GFP). Так же тестировали два вектора на основе AAV с разными трансгенами - с GFP под промотором DCX и с FerrH так же подпромотором DCX. Векторы вводили путем стере-отаксических инъекций в нейрогенную субвентрикуляр-ную зону вблизи боковых желудочков головного мозга. В контралатеральное полушарие, которое использовали в качестве контроля, вводили фосфатный буфер. На третьи сутки после инъекции анализировали срезы, окрашенные методом флуоресцентной ИГХ с антителами к DCX и FerrH. Эффективность трансфекции молодых нейроновопределяли как процент площади колокализации сигналов DCX и трансгенов этих векторов - GFP или FerrH относительно DCX-позитивной площади в нейрогенной зоне вблизи боковых желудочков. Предварительные результаты показали незначительные различия в эффективности трансфекции между опытным (35%) и контрольным полушарием (28%) у животных, инъектированных обоими типами векторов на основе AAV. В то же время у животных с инъекцией векторов на основе LV трансфекция молодых нейронов вдвое выше в опытном полушарии (86%) по сравнению с контрольным (41%). Вероятно менее интенсивное распространение вектора на основе LV связано с иммунным ответом, давления которого не испытывают векторы AAV. Протестированные векторные конструкции могут быть использованы в дальнейшем для исследования нейрогенеза in vivo у животных.