Funktsional'noe sostoyanie mezenkhimnykh stvolovykh kletkok zhirovoy tkani pri ikh vzaimodeystvii s tonkoplenochnymi nositelyami na osnove polisakharidov

Abstract

Full Text

Актуальной задачей регенеративной медицины является создание тканеинженерных конструкций на основе мезенхимальных стволовых клеток (МСК), для восстановления поврежденных тканей и органов человека, что обуславливает необходимость поиска биосовместимых соединений, выполняющих роль матрицы-носителя для клеточного компонента. Целью данного исследования являлось изучение адгезии, жизнеспособности, внутриклеточного содержания активных форм кислорода (АФК), иммунофенотипа МСК из жировой ткани человека при их взаимодействии с 4 бислойными пленками, содержащими в качестве поликатиона хитозан или полиэтиленимин (ПЭИ), а в качестве полианиона - пектин цитрусовый, сульфатированный декстран или карбоксиметилцеллюлозу. Проведенные исследования показали, что МСК эффективно адгезируют на поверхности тонкопленочных носителей, в которых в роли поликатиона использовался хитозан, а на поверхности ПЭИ содержащих пленок способность клеток к адгезии снижается. Критерием эффективности адгезии МСК служило наличие в культуре клеток фибробластоподобной формы через сутки после культивирования на носителях. Так на хито-зан-содержащих пленках МСК были представленны клетками, имеющими фибробластоподобную форму, тогда как в случае ПЭИ в культуре преобладали клетки округлой формы. Окрашивание флуоресцеин диацетатом и пропидиум иодидом через 5 суток культивирования показало низкое содержание в культуре клеток в состоянии некроза (3-5%) на хитозан-содержа-щих пленках и значительно более высокое (40-80%) на ПЭИ-содержащих. Установлено, что после инкубации МСК (2 ч) на поверхности носителей, к которым они проявляют сниженную способность к адгезии (ПЭИ-содержащие пленки) в клетках регистрируется более высокая интенсивность флуоресценции зонда 5-(-6)-хлорометил-2',7'-дихлородигидрофлуоресцеин диацетата по сравнению с хитозан-содержащими пленками. Это свидетельствует о росте в клетках содержания АФК, что может лежать в основе низкой адгезии и жизнеспособности МСК на данных носителях. Однако добавление в среду инкубации антиоксидантов (эмок-сипин, кверцетин) не влияло на адгезию МСК, что позволяет предполагать отсутствие токсического влияния ПЭИ-содержащих носителей на клетки. Кроме этого установлено снижение экспрессии CD13, CD29, CD44, CD73, CD90 и увеличение CD34 в МСК после культивирования на ПЭИ-содержащих пленках (1 сутки). Это указывает на изменение в МСК состава поверхностных белков и, вероятно, является результатом реакции клеток на дефицит субстрата для рецепторов адгезии.