Issledovanie effektivnosti deystviya alkoksiarilproizvodnykh imidazolina v kachestve potentsial'nykh ingibitorov belok-belkovogo vzaimodeystviya r53-MDM2

Abstract

Full Text

Ингибирование белок-белкового взаимодействия р53-MDM2 является перспективным направлением в терапии онкологических заболеваний для элиминации опухолевых клеток, сохраняющих р53 дикого типа. Белок р53, обеспечивающий стабильность генома и генетическую однородность клеток, выполняет функцию онкосупрессора, активируясь под действием различных стрессовых стимулов, и является важнейшим медиатором ареста клеточного цикла, старения и апоптоза. В норме в клетках наблюдается низкий уровень р53 за счет его постоянной протеасомной деградации под действием убиквитин-лигазы MDM2. Примером соединений, обеспечивающих эффективное блокирование взаимодействия MDM2 с р53 и ведущих к повышению концентрации р53 в клетках, являются нутлины, представляющие собой имидазолиновые производные. В настоящей работе была исследована биологическая активность алкоксиарилпроизводных имидазолина как в сравнении с фрагментом молекулы нутлина (4Cl арилпроизводное), так и с полной молекулой нутлина-3а. Молекулярный докинг показал, что орто- и парапроизводные имидазолина (4-МеО, 2,4-diMeO, 4-EtO) могут эффективно связываться с белком MDM2 в сайте, отвечающим за взаимодействие c р53. Исследования биологической активности проводились на клеточных линиях аденокарциномы легкого А549 и колоректального рака RKO при помощи методов вестерн-блот анализа и проточной цитофлуориметрии. Наиболее эффективно на клетки линии А549 действовало 2,4-diMeO производное, увеличивая уровень р53 в 3.4 раза по сравнению с контролем, при этом остальные соединения также показали максимальную эффективность при концентрации 20 мкМ. Результаты на линии RKO подтвердили эффективность действия 2,4-diMeO, обработка клеток которым вела к увеличению уровню р53 в 2.8 и 3.8 раза при концентрациях 10 и 20 мкМ, соответственно. В результате анализа клеточной гибели на линии А549 было выявлено, что 4-МеО и 2,4-diMeO практически не стимулировали индукцию апоптоза или некроза в концентрациях вплоть до 80 мкМ, что аналогично действию нутлина-3а, который вызывает апоптоз на линии А549 только в сочетании с ДНК-повреждающими агентами. Напротив, использование 4-EtO вело к значительной некротической гибели клеток в концентрациях свыше 20 мкМ, что свидетельствовало об его неспецифической токсичности. Таким образом, результаты исследования продемонстрировали наличие способности увеличивать уровень р53 в опухолевых клетках у алкоксиарилпроизводных имидазолина.