RESEARCH OF SHORT PROKARYOTIC ARGONAUTE PROTEINS

Abstract

Full Text

Белки-аргонавты эукариот играют ключевую роль в процессе РНК-интерференции. В комплексе с некодирующими РНК они регулируют экспрессию генов, а также способны подавлять активность мобильных генетических элементов. В отличие от белков-аргонавтов эукариот, о прокариотических белках-аргонавтах известно очень мало. Белки-аргонавты прокариот значительно более разнообразны, чем белки-аргонавты эукариот по строению и функциям. Так называемые короткие белки-аргонавты не содержат N- и PAZ- доменов. PAZ-домен ответственен за взаимодействие с 3' концом направляющей нуклеиновой кислоты, а N-домен облегчает расплетание РНК-дуплекса во время загрузки гида в эукариотические аргонавты. Также короткие аргонавты каталитически неактивны, так как не содержат ключевых каталитических остатков в PIWI-домене. Исследования геномов прокариот показали, что такие белки-аргонавты могут быть ассоциированы с белками с предсказанной нуклеазной активностью, которая может компенсировать отсутствие нуклеазной активности самого аргонавта. В нашей работе впервые начаты исследования короткого бактериального белка-аргонавта и ассоциированной с ним нуклеазы из мезофильной азотфиксирующей бактерии. Созданы плазмиды для экспрессии белка-аргонавта, ассоциированной с ним нуклеазы и их совместной экспрессии в E.coli. Подобраны условия экспрессии и очистки этих белков. В настоящее время проводится ряд экспериментов для установления природы ассоциированных с аргонавтом нуклеиновых кислот, а также проверки активности комплекса белка-аргонавта и ассоциированной с ним нуклеазы in vitro. Эти исследования позволят в дальнейшем ответить на вопрос о функциях короткого белка-аргонавта и ассоциированной с ним ну-клеазы в клетке хозяина.