Kul'tivirovanie kletok zadnego epiteliya rogovitsy cheloveka s ispol'zovaniem biopokrytiya kollagena I tipa

Abstract

Full Text

Актуальность. Клетки заднего эпителия роговицы человека играют ключевую роль в регуляции гидратации роговицы. Воспроизводимая культура данных клеток в перспективе может служить источником аллогенного материала как для клеточной терапии заболеваний роговицы, так и для воссоздания биоинженерной конструкции роговицы. Цель. Провести сравнительное исследование клеток заднего эпителия роговицы, культивированных на стандартной культуральной поверхности и при использовании биопокрытия из коллагена I типа. Материалы и методы. В исследовании использовались донорские роговицы, непригодные для трансплантации по клиническим кретериям с сохранным задним эпителием, полученные из Глазного тканевого банка учреждения. Нанесение биопокрытия из коллагена I типа осуществлялось на стандартную культуральную поверхность чашки Петри 35 мм. Выделение клеток проводили по протоколу, разработанному авторами ранее. Культивирование проводили в культуральной среде DMEM F12/199 (1:1), c 10% фетальной бычьей сыворотки, 1% раствора антибиотиков и 2 мМ L-глютамина. Оценку фенотипа полученных клеток и клеток заднего эпителия нативной роговицы проводили методом иммуногистохимии. Для этого, полученные образцы окрашивали антителами к a-глакомышечному актину, вименти-ну, люмикану, №+/К+-АТФ-азе, N-кадгерину, E-кадгерину, цитокератин-7, -10, -13, -19, коннексину-43, ZO-1. Результаты. Клетки, культивированные в чашке Петри с биопокрытием коллагена I типа, отличались большей скоростью адгезии к культуральной поверхности. Количество клеток, c эпителиально-мезенхимальную трансформацию было достоверно выше в культуре, полученной в результате культивирования без использования биопокрытия (p<0,001). Достоверной разницы в скорости достижения конфлюэнтности 80-90% между образцами, культивированными с использованием биопокрытия и без него, выявлено не было. Достоверно меньший уровень экспрессии a-глакомышечного актина в культуре клеток, культивированных на биопокрытии из коллагена I типа в сравнении как с интактными клетками нативной роговицы, так и с клетками, культивированными без использования биопокрытия, позволяет косвенно судить о меньшей степени выраженности процесса эпителиально-мезенхимальной трансформации в данном образце. Заключение. По результату проведенного исследование было доказано необходимость использования биопокрытия из коллагена I типа для уменьшения эпителиально-мезенхимальной трансформации.