EFFECT OF N-DOCOSAHEXAENOYLDOPAMINE ON SURVIVAL AND INTRACELLULAR CALCIUM IN CULTURED NEURONS AT GLUTAMATE EXCITOTOXICITY

Abstract

Full Text

Патологические процессы в мозге, сопровождающиеся повышением внутриклеточной концентрации Са2+ ([Ca2+]i), приводят к гибели нейронов. Нейролипины, эндогенные производные жирных кислот, могут проявлять нейропротекторные свойства при инсульте, травме мозга и развитии нейродегенеративных заболеваний, когда основной возбуждающий нейромедиатор мозга глутамат (Glu) становится нейротоксином. В данной работе исследовано влияние нейролипина N-докозагексаеноилдофамина (DHA-DA), на выживаемость и Са2+ гомеостаз клеток мозга в условиях глутамат-ной эксайтотоксичности. Первичные нейрональные культуры получали из коры головного мозга 1-дневных крысят Wistar и содержали при 37оС, 100% влажности и 5% CO2 в течение 10 дней до эксперимента. DHA-DA добавляли за 1 час до Glu (100 мкМ, Gly 10 мкМ, 0 Mg2+) и затем 15 мин вместе с Glu. Измерения [Ca2+]i производили при помощи флуоресцентного зонда Fura-FF c использованием системы анализа изображений на базе инвертированного микроскопа и мультиволнового возбуждения и регистрации сигналов. Выживаемость культуры определяли через 24 часа после прекращения действия Glu (1 час), измеряя на планшетном ридере оптическую плотность тетразолия, образовавшегося из водорастворимой формы формазана (WST-тест). Инкубация с DHA-DA (0,01 или 1 мкМ, 15 мин) не изменяла [Ca2+]i в покоящихся нейронах. Добавка Glu (100 мкМ, 10 мкМ Gly, 0 Mg2+, 15 мин) вызвала развитие отсроченной кальциевой дизрегуляции (ОКД) [1, 2], причем предварительное введение низкой концентрации DHA-DA (0,01 мкМ) сокращало на 13±12% (M±SeM) время наступления ОКД и снижало на 12±4% максимальное увеличение [Ca2+]i. Высокая доза DHA-DA (1 мкМ), не влияла на ЛАГ-период ОКД, но понижала максимальный подъем [Ca2+]i на 27±4%. Нейролипин в концентрации 0,01 и 1 мкМ увеличивал не менее чем на 18%, и 9% долю клеток, способных восстановить низкую [Ca2+]i после удаления Glu. Согласно WST-тесту нейротоксический эффект Glu составил 31±9%. DHA-DA (1 мкМ) повышал выживаемость клеток при действии Glu на 29±4%. Таким образом, DHA-DA (1 мкМ) защищает клетки нейроглиальной культуры из коры мозга крысы от токсического действия Glu. Нейропротекторное действие DHA-DA опосредовано, по крайней мере, отчасти, отдалением наступления ОКД, и, соответственно, увеличением доли нейронов, сохранивших низкую [Ca2+]i во время действия Glu. i