Differentsial'naya stabil'nost' kol'tsevykh khromosom v indutsirovannykh plyuripotentnykh stvolovykh kletkakh



Cite item

Full Text

Abstract

Full Text

Вариабельность и неопределенность фенотипических проявлений кольцевых хромосом (КХ) является серьезной проблемой, поскольку не существует однозначной корреляции между размером или генным составом КХ, ее стабильностью, распространенностью тканевого мо-заицизма и тяжестью фенотипических аномалий у пациента. Экспериментальных исследований для выявления факторов, определяющих масштабы мозаицизма и стабильность КХ, пока не проводилось. Индуцированные плюрипотентные стволовые клетки (ИПСК) представляются удобной платформой для изучения стабильности КХ в делящихся клетках. Нами получены культуры фибробластов от пациентов с КХ 8, 13, 18 и 22 с последующим репрограммированием в ИПСК путем экзогенной экспрессии транскрипционных факторов KLF4, OCT4, SOX2 и с-MYC с использованием лентивирусных векторов LeGO. Полученные линии демонстрировали экспрессию маркеров плюрипотент-ности и способность к дифференцировке в производные трех зародышевых листков. Стабильность КХ оценивали на различных пассажах с помощью GTG, FISH и микрома-тричного анализа. К настоящему времени стабильность КХ проанализирована для 2 линий c r(22) и 4 линий с r(13). В обеих линиях с r(22) клетки с КХ устойчиво сохранялись и составляли абсолютное большинство на протяжении 38 и 60 пассажей, минорный класс представляли клетки с моносомией 22. Четыре линии ИПСК с r(13) отличались разнообразием кариотипов: две из них состояли преимущественно из клеток с кариотипом 46,XY,r(13), тогда как в двух других линиях преобладали клетки с кариотипами 46,XY,-13,+mar и 45,XY,-13. К 20 пассажу кариотип 46,XY,r(13) становился превалирующим во всех линиях независимо от предыдущего соотношения клеточных субпопуляций, однако в среднем после 25 пассажа в 3 из 4 линий появились клетки с рекуррентными трисомиями хромосом 17 и 12. Молекулярно-цитогенетическая характеристика с помощью микрочипов свидетельствовала о выраженной фрагментации КХ 13 и клеточной гетерогенности в 2 из 4 линий. Таким образом: 1) существуют отличия в митотической стабильности разных кольцевых хромосом в ИПСК; 2) наблюдается разная степень динамического мозаицизма и микроструктурных аберраций r(13) в разных линиях ИПСК; 3) индуцированная плюрипо-тентность оказывается совместимой с широким спектром аберрантных кариотипов.
×

References

Supplementary files

Supplementary Files
Action
1. JATS XML
Download

Copyright (c) 2019 Eco-Vector


СМИ зарегистрировано Федеральной службой по надзору в сфере связи, информационных технологий и массовых коммуникаций (Роскомнадзор).
Регистрационный номер и дата принятия решения о регистрации СМИ: