THE ROLE OF IKKB, SRC AND RIPK KINASES IN THE ADAPTATION OF NERVE CELLS TO HYPOXIA AND GLUCOSE DEPRIVATION IN VITRO

Abstract

Full Text

Киназы - большая группа ферментов, регулирующая протекание многочисленных метаболических процессов в клетке, таких как клеточная пролиферация, диффе-ренцировка, регуляция генов выживания. Они являются возможными терапевтическими мишенями при действии различных повреждающих факторов, например, ишемии, однако в настоящее время неизвестно, какую именно роль в адаптации нервных клеток к повреждающим воздействиям играют многие киназы. Нами были исследованы нейропротекторные свойства киназ IKKb, SRC и RIPK при моделировании гипоксии и глюкозной депривации как основных факторов ишемии. Объектом исследования являлись первичные культуры коры клеток головного мозга, полученные от эмбрионов мышей линии С57Bl/6 (Е18). Моделирование глюкозной депривации (ГД) и гипоксии осуществлялось на 1 4 сутки развития культур. Блокаторы соответствующих киназ (1 мкМ) добавляли при моделировании повреждающих факторов. Показано, что блокада киназ IKKb, SRC и RIPK в условиях нормы не оказывала влияния на жизнеспособность клеток. Исследованы особенности воздействия блокаторов на жизнеспособность нервных клеток in vitro при моделировании различных факторов ишемии. Блокада киназ IKKb и SRC повышала жизнеспособность при действии обоих факторов (Интактная культура - 94,34±1,32%, Гипоксия - 77,94±1,75%, Гипоксия + ингибитор IKKb - 94,83±1,39%, Гипоксия + ингибитор SRC - 87,03±1,02%, ГД - 78,79±0,99%, ГД + ингибитор IKKb - 90,32±1,2%, ГД+ ингибитор SRC - 88,33±1,21%). Блокада киназы RIP при ГД сохраняла жизнеспособность клеток (86,83±1 ,49%), а при гипоксии, напротив, снижала (66,09±4,61%). На втором этапе мы исследовали функциональную кальциевую активность первичных культур клеток гиппокампа с помощью кальциевого имиджинга с применением кальций-чувствительного красителя Оregon Green 488. При моделировании гипоксии и глюкозной депривации происходило достоверное снижение числа клеток, проявляющих спонтанную кальциевую активность (Интактная культура - 60,43+1,15%, Гипоксия - 35,91+1,05%, ГД - 36,98+4,64%). Блокада киназы SRC повышала процент клеток, проявляющих функциональную кальциевую активность только в случае моделирования глюкозной депривации (46,18+2,96%). Ингибирование IKKb снизило число клеток, проявляющих активность при глюкозной депривации (21,54+4,58%), но не оказало влияния при моделировании гипоксии. Следует отметить, что блокада RIPK сохраняла функциональную кальциевую активность нервных клеток при действии обоих стресс-факторов (при гипоксии - 57,05+11,74%, при ГД - 74,81+5,15%).