Ekspressiya genov tsitokinov v follikulakh volos cheloveka

Abstract

Full Text

Рост волос контролируется системой сигналов между кератиноцитами, клетками дермального сосочка и стволовыми клетками. Известно, что интерлейкины (ИЛ) 6,10,23 могут координировать взаимодействие клеток волосяных фолликулов (ВФ). Цель: исследование экспрессии генов интерферонов (ИФН) 3 основных типов (a, р, у, X) и ИЛ на уровне транскрипции и трансляции. Методы: ВФ в фазе анагена из зоны темени и затылка здоровых людей и пациентов с андрогенетиче-ской алопецией (АГА), извлеченные вручную, лизирова-ли в растворе гуанидинизотиоцианата для выделения РНК или механически гомогенизировали в буферном растворе для анализа белков. Суммарные нуклеиновые кислоты из ВФ выделяли с использованием набора «Проба-НК» («ДНК-технология», Москва) и проводили обратную транскрипцию с ПЦР с гибридизационно-флуоресцентной детекцией в реальном времени (ОТ-ПЦР-РВ). Иммунофлуоресцентный анализ с использованием магнитных микросфер (xMAP) осуществляли с применением наборов 17xplex (Bio-Rad, США) и оборудования MagPix (Merk). Результаты: по данным ОТ-ПЦР-РВ в лизатах ВФ детектируется мРНК ИФН a, р, у (но не ИФН X), а также ИЛ 6, ИЛ10 и ИЛ23, что подтверждается результатами мультиплексного иммунофлуоресцентного анализа, показавшего наличие иЛ2, 4, 8, 10, 12, 13, ИФН у, G-CSF, MCP-1, MIP-1 р, но не ИЛ 1 р , ИЛ17А и TNFa. р Выявлена прямая корреляция экспрессии генов ИФН 1 типа (между мРНК ИФН a и ИФН р (r=0,98)). Общей тенденцией был сниженный на 10% уровень количества РНК цитокинов в ВФ из зоны затылка по сравнению с зоной темени, при этом достоверных различий между здоровыми людьми и пациентами не наблюдалось. По данным ИФА продукция ИЛ10 в ВФ здоровых добровольцев (0,26±0,12 пкг/ ВФ) была выше, чем у пациентов (0,08±0,03 пкг/ВФ), р<0,05. Выявлена отрицательная корреляция между количествами мРНК (r = -0,44) и белков ИЛ6 и ИЛ10 (r = -0,65), возможно, в результате подавления секреции ИЛ6 регуляторным ИЛ 10. Заключение: в фолликулах экстрагированных вручную волос человека в фазе ана-гена детектируется экспрессия генов цитокинов и их продукция в норме и при АГА. В ВФ человека методами ОТ-ПЦР-РВ, ИФА и xMAP показана экспрессия генов ИФН 1 и 2 типа, а также ряда ИЛ, среди которых регуляторный ИЛ10, по-видимому, может ингибировать секрецию ИЛ6. При низких уровнях продукции количества цитоки-нов не превышали содержания молекул мРНК.