Funktsional'naya aktivnost' makrofagov in vitro u bol'nykh ostrym infarktom miokarda

Abstract

Full Text

Введение. В настоящее время идёт активный поиск путей предотвращения неблагоприятного постинфаркт-ного ремоделирования сердца. Одним из перспективных способов является контроль секреции моноцитами/макрофагами некоторых цитокинов. Известно, что TNF-a в низких концентрациях защищает миокард, но при высоких оказывает токсическое действие. Цель. изучить возможность использования культуры макрофагов, полученной из моноцитов крови пациентов с инфарктом миокарда, для дальнейшего исследования генома и эпигенома клеток. Оценить in vitro динамику секреции макрофагами TNF-a под влиянием IL-4 и INF-y. Материалы и методы. Для выделения моноцитов производился забор 30 мл крови у 3 здоровых доноров и 3 больных инфарктом миокарда на 3 (ранний срок) и 5 сутки заболевания (поздний срок). Мононуклеарную фракцию подвергали CD1 4+ сепарации по протоколу компании MytlenylBiotec (Германия). Чистоту фракции определяли путём проточной цитофлюорометрии. Количество жизнеспособных клеток определяли при помощи йодистого пропидия. Для культивации клеток были использованы бессы-вороточная среда X-VIVO 10M (Cambrex) и среды содержащие IL-4 и INF-y. На 3 и 6 сутки отбирали супернатанты и определяли концентрацию TNF-a методом ИФА тест системами «Вектор Бест». Результаты. У здоровых доноров среднее количество мононуклеаров в крови составило 17,8x106 клеток, моноцитов - 6,2 x 106 клеток. У пациентов с инфарктом миокарда (ИМ) эти показатели равны 18,5x106 и 5,8x106 соответственно. Чистота выделенных моноцитов составила не менее 95%, число жизнеспособных клеток - 94%. Результаты анализа определения концентраций TNF-a в супернатантах показали, что IL-4 снижает выработку TNF-a в каждой группе. Независимо от срока ИМ снижение наступает на 3 сутки культивации (на раннем сроке с 10,2 до 4,5 пг/мл и на позднем с 8,1 до 3,5 пг/мл). У здоровых доноров снижение отмечается только на 6 сутки (с 10,0 до 4,2 пг/мл). IFN-y вызвал снижение секреции TNF-a у здоровых (с 10,0 до 6,2 пг/ мл) и больных на раннем сроке ИМ (с 11,1 до 6,2 пг/мл) только на 6 сутки культивации. Заключение. В ходе исследования освоена методика выделения моноцитов из венозной крови при помощи CDM+^озитивной магнитной сепарации с высоким уровнем чистоты и жизнеспособности моноцитов. Выявлены различия в динамике секреции TNF-a под влиянием IL-4 и INF-y у здоровых людей и у пациентов с инфарктом миокарда в разные сроки заболевания.