AROA-1 sposobstvuet sokhraneniyu zhiznesposobnosti mezenkhimal'nykh stromal'nykh kletok v neblagopriyatnykh usloviyakh kul'tivirovaniya

Abstract

Full Text

Уникальные свойства мезенхимальных стромальных клеток костного мозга (МСК) позволяют рассматривать их в качестве терапевтического агента многих заболеваний. Клинические исследования подтвердили безопасность клеточной терапии МСК, однако данные по их эффективности противоречивы. Снижение эффективности связывают с низкой выживаемостью трансплантированных клеток. Клеточная терапия на фоне СД 2 типа осложнена токсическими метаболитами и высоким уровнем активных форм кислорода (АФК). В нашей работе мы проанализировали влияние сывороток крови 80 пациентов СД 2 типа на функциональную активность МСК. Было показано, что 35,6% сывороток снижали выживаемость клеток более чем на 40%, в то время как контрольные сыворотки повышали выживаемость клеток до 115±20%. В условиях моделируемого окислительного стресса у 41% сывороток отсутствовали защитные антиоксидантные свойства. Известно, что липопротеины высокой плотности (ЛПВП) и их основной компонент - белок АроА-1 обладают антиоксидантными свойствами. Было показано функциональное нарушение ЛПВП и АроА-1 у пациентов с СД 2 типа. Нами установлено, что АроА-1 проникает в МСК, повышая выживаемость клеток в условиях депривации сыворотки на 11%. Уровень включения Н3тимидина был на 35±3% выше в присутствии белка в течение 18 часов. АроА-1 повышает процент клеток в S-G2/M фазах клеточного цикла в 1,5 раза по сравнению с контролем в бессывороточной среде. Депривация сыворотки и кислорода вызывала накопление клеток до 80±2% в фазах G0/G1 с отсутствием апоптотической гибели. АроА-1 в этих условиях не влиял на показатели пролиферации клеток, тем самым не нарушая физиологический переход клеток в фазы G0/G1 в неблагоприятных условиях. В условиях моделируемого окислительного стресса (100-500 мМ Н2О2 (24ч)) происходит активация пролиферации МСК с увеличением гибели клеток в первые часы инкубации. Добавление АроА-1 способствовало поддержанию нормального уровня пролиферации, снижению апоптоза и повышению общего количества клеток в 1,5 раза. Эффект АроА- 1 был дозозависимым. Так, для проявления защитного эффекта АроА-1 при добавлении 500 мМ Н2О2 требуется в 4 раза больше белка (40 мкг/мл). Таким образом, АроА-1, предохраняет клетки от пе-рекисного окисления, поддерживает жизнеспособность клеток и пролиферативный потенциал в условиях сывороточного голодания и может быть использован в качестве компонента бессывороточных сред для целей культивирования и трансплантации на фоне метаболических нарушений.