EXAMINATION OF RESIDUAL FUNCTION OF CFTR CHLORIDE CHANNEL OF THE PATIENT WITH CFTRDELE2,3/E403D GENOTYPE IN INTESTINAL ORGANOID MODEL

Abstract

Full Text

Муковисцидоз (МВ) является наиболее распространенным, опасным для жизни, аутосомно-рецессивным заболеванием. Варианты нуклеотидной последовательности в гене трансмембранного регулятора проводимости муковисцидоза (CFTR) приводят к нарушению синтеза цАМФ-зависимого хлорного канала CFTR или к образованию белка со сниженной функциональной активностью. На сегодняшний день зарегистрировано свыше 2000 генетических вариантов CFTR, большинство из которых являются редкими. Частота варианта CFTRdele2,3 составляет 5% всех аллелей МВ, он относится к I классу. Редкий генетический вариант E403D (p.Glu403Asp, c.1209G>T) относится к миссенс мутациям, представляет собой замену глутаминовой кислоты на аспарагиновую в положении 1209 9-го экзона гена CFTR. На сегодняшний день данные о клинической значимости варианта E403D, а также о влиянии CFTR модуляторов на активность белка отсутствуют. Цель: изучение функциональной активности канала CFTR и эффективности CFTR модуляторов у пациента с генотипом CFTRdele2,3/E403D. Материалы и методы. Из биоптатов толстого кишечника пациента была получена культура кишечных органоидов. Функциональную активность канала CFTR исследовали при помощи форсколинового теста. В качестве контролей использовали культуры кишечных органоидов, полученные от пациентов МВ с генотипами E92K/ F508del и F508del/F508del и здоровых добровольцев. Результаты. В анамнезе пациента 2013 г. р. с генотипом CFTRdele2,3/E403D и смешанной формой течения заболевания указаны хронический обструк-тивный бронхит, хроническая панкреатическая недостаточность, хроническая стафилококковая инфекция, интермиттирующий высев Pseudomonas aeruginos, аллергический бронхолегочный аспергилез. Одним из маркеров патогенности вариантов нуклеотидной последовательности гена CFTR являются морфологические особенности органоидов, они неправильной формы, с утолщенными стенками и с редуцированным люменом. CFTRdele2,3/E403D органоиды внешне не отличаются от контрольных культур пациентов с МВ. Данные форсколинового теста указывают на полное нарушение проводимости канала CFTR. Эффекты корректора (VX-809) и потенциатора (VX-770), в отличие от контрольных образцов, не выявлены, что доказывает «тяжесть» исследуемого генотипа и его вариантов нуклеотидной последовательности. Выводы. Было показано, что генетический вариант E403D - патогенный. Генотип CFTRdele2,3/E403D является «тяжелым» и не поддается коррекции существующими модуляторами CFTR. Таблица. Сопоставление профилей микрофлоры (%) у обладателей различных вариантов G215C гена TP53 (rs1042522)