Sravnitel'nyy analiz neyrotroficheskikh i neyroprotektornykh svoystv neyronal'nykh, glial'nykh predshestvennikov i mul'tipotentnykh mezenkhimal'nykh stromal'nykh kletok

Full Text

Введение. Лечение неврологических заболеваний, таких как ишемический инсульт, спинальная травма не имеют эффективного лечения и до сих пор остаются частыми причинами смертности и инвалидизации. Перспективным направлением служит клеточная терапия, одним из механизмов действия которой может являться секреция трансплантированными клетками биологически активных факторов. Целью исследования является изучение нейропротективных и нейротро-фических свойств нейрональных предшественников (НП), глиальных предшественников (ГП), полученных путем дифференцировки индуцированных плюрипо-тентных стволовых клеток (ИПСК) и мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток (ММСК) в моделях глутаматной токсичности и при направленной дифференцировке. Материалы и методы. Исследование проводили на линии феохромоцитомы крысы (PC-12). Использовали кондиционированные среды (КС) НП, ГП и ММСК, полученные после 12 часов культивирования в среде DMEM/ F12, (содержание общего белка 0,5 мг/мл). Для моделирования глутаматной токсичности клетки PC-12 культивировали в среде DMEM с 10% ЭТС в 96-луночном планшете. За 24 часа до добавления глутамата в лунки вносили КС, затем добавляли глутамат (10 мМ). Через 24 часа проводили МТТ тест и окрашивание Hoechst 33342. Для дифференцировки клетки PC-12 культивировали в среде OptiMem c 1% ЭТС в 24-луночном планшете. На 6 сутки после добавления КС оценивали количество и среднюю длину нейритов. Результаты. В условиях глутаматной токсичности жизнеспособность клеток PC-12 увеличивалась при добавлении КС ГП на 21 ±5%, а КС ММСК - на 10±3%, количество апоптотических клеток уменьшилось с 11±3% до 4±2% и до 7±2% соответственно. КС НП не оказала значимого действия по сравнению с контролем. При направленной дифференцировке в образцах с добавлением КС ГП выявлено увеличение количества и средней длины нейритов (154% от контроля). При добавлении КС ММСК изменений по сравнению с контролем не выявлено, а КС НП, напротив, замедляла нейритогенез (57% от контроля). Выводы. В моделях in vitro показано, что КС ГП оказывает нейропротекторное и нейротрофическое действие, превосходящее по эффективности влияние КС ММСК и НП. Полученные результаты являются обоснованием терапевтических эффектов ГП и служат основанием для разработки новых методов клеточной терапии.

About the authors

Georgiy Evgen'evich Leonov

Diana Irekovna Salikhova

Tat'yana Borisovna Bukharova

Zoya Valentinovna Kornienko

Natal'ya Vadimovna Bulatenko

Oleg Vladimirovich Makhnach

Andrey Vital'evich Makarov

Timut Khaysamutdinovich Fatkhudinov

Sergey L'vovich Kiselev

Dmitriy Vadimovich Gol'dshteyn

References

Supplementary files