Dostavka spetsifichnykh membrannykh retseptorov v kletki-misheni s pomoshch'yu iskusstvennykh mikrovezikul

Abstract

Full Text

Клеточная терапия на основе мезенхимных стволовых клеток (МСК) несет большие риски. Однако везикулы, высвобождаемые МСК, имеют на поверхности те же рецепторы, что и родительские клетки и обладают тем же терапевтическим эффектом. Более того, они не несут рисков онкотрансформации и являются безопасным терапевтическим инструментом. Метод, разработанный Pick et al., позволяет получить индуцированные микровезикулы (МВ) с помощью цитохалазина В (ЦВ) в большом количестве, за счет блокировки полимеризации актиновых микрофиламентов цитоскелета. МВ-ЦВ являются перспективным вектором для доставки различных лекарственных веществ и наночастиц. Наличие клеточных мембран, которым окружены МВ-ЦВ, обеспечивают более естественный подход к задачам инкапсуляции и доставки in vivo. Естественные микровезикулы могут переносить растворимые факторы, а также поверхностные рецепторы путем слияния цитоплазматических мембран. Однако способны ли искусственные микровезикулы, полученные с помощью цитохалазина В, к доставке специфичных мембранных рецепторов в клетки-мишени исследовано до настоящего времени не было. Поэтому мы оценили перенос поверхностного рецептора, специфичного для МСК, к клеткам-реципиентам HEK293FT, у которых отсутствует экспрессия выбранного рецептора, с помощью искусственных микровезикул. МВ-ЦВ были получены из МСК, выделенных из жировой ткани человека. Морфологию и размер МВ-ЦВ МСК человека анализировали с помощью сканирующей электронной микроскопии. МВ-ЦВ МСК имели сферическую структуру и размеры от 100 до 2600 нм. Однако основная часть (89,36%) входила в диапазон от 100 до 1200 нм. Клетки HEK293FT предварительно окрашивали флуоресцентным мембранным красителем DiO и культивировали в течение 24 часов с DiD-меченными МВ-ЦВ МСК. Экспрессия CD90 (Thy-1) была выбрана для демонстрации переноса рецептора, поскольку она специфична для МВ-ЦВ МСК и отсутствует на клетках HEK293FT. Экспрессию CD90 анализировали с использованием лазерного сканирующего конфокального микроскопа Zeiss LSM 780 и проточной цитофлуориме-трии BD FACS Aria III. Мы обнаружили, что мембраны МВ-Цв МСК и HEK293FT слились, и поверхностный рецептор CD90 был перенесен на клетки HEK293FT. Мы определили, что 99,14% клеток-реципиентов HEK293FT приобрели CD90+ иммунофенотип. Полученные нами данные свидетельствуют о том, что МВ-ЦВ МСК переносят поверхностные рецепторы к клеткам-реципиентам HEK293FT.