STUDY OF THE CELL CYCLE, NUCLEAR LAMONE AND P-GALACTOSIDASE ENZYME IN HUMAN DERMAL FIBROBLAST DURING THE DEVELOPMENT OF CANCER AND ACCELERATED AGINGIN

Abstract

Full Text

В работе исследовались клеточные линии дермальных фибробластов двух пациентов с раком молочной железы РМЖ30 и РМЖ55 (30 и 55 лет); трёх пациентов с риском развития опухоли: носительница мутации 5382insC (c.5266dup) в гене BRCA1 30 лет (brCa1SP) и гетеро-зигоные носители мутации в гене АТМ, мамы пациентов атаксии-телеангиэктазии 37 и 39 лет (AT8SMP и AT9MSP) соответственно; а также линии пациентов с синдромом ускоренного старения Синдром Коккейна 2 и 8 лет (CS7SP и CS6SP) соответственно. В качестве контроля использовались линии от здоровых доноров 2,5, 30 и 55 лет. В исследуемых линиях методом проточной цитометрии были изучены клеточный цикл и построена кривая роста; методом непрямой иммунофлюоресценции исследованы состояние ядерной ламины при помощи окрашивания антителами к LMNA А/C; при помощи коммерческого набора для окрашивания ассоциированной со старением фермента бетагалактозидазу (SA-p-gal) определялось количество фермента. Результаты исследования изменения доли клеток фаз клеточного цикла спустя 1 и 3 сутки после посева одинакового числа клеток во всех линиях и сопоставления данные с кривой роста выявило существенное снижение прлиферативной способности клеток в линиях группы риска развития рака BRCA1SP, AT8MSP и AT9MS. При исследовании накопления морфологического изменения ядерной ламины с применением подхода, описанным нами раннее (Kaissi et al., 2017), было показано, что наиболее сильнее выражены признаки старения клетки (одновременно фрагментация и блеббы, а также фрагментация ядра) в клеточных линиях BRCA1SP, CS6SP и CS7SP. Однако характерный «ободок» ядерной ламины, свидетельствующий о её истончении, наблюдался только в дермальных фи-бробластах пациентов с синдромом ускоренного старения Синдроме Коккейна. Исследование оптической плотности фермента SA-p-Gal показало, что наибольшее количество фермента демонстрировали клетки линии BRCA1SP. Результаты работы показали, что некоторые признаки, характерные для клеточного старения, такие как накопления аберраций ядерной ламины и количество фермента SA-p-Gal можно увидеть в дермальных фи-бробластах пациентов из группы риска развития рака. Однако такая характеристика состояние ядерной лами-ны, как наличие «ободка» детектируется только у пациентов с ускоренным старением.